甘蓝型油菜MICMS细胞质雄性不育恢复基因的RAPD标记研究.pdfVIP

甘蓝型油菜MICMS细胞质雄性不育 恢复基因的RAPD标记 张洁夫傅寿仲 戚存扣 浦惠明 陈新军 高建芹 江苏省农业科学院经济作物研究所，江苏南京210014 利用杂种优势是解决油菜品质与产量矛盾的重要途径，而细胞质雄性不育三系杂种仍 是油菜杂种优势利用的主要方式。目前国内在大面积生产上应用较为广泛的油菜细胞质雄 性不育类型主要有PolCMS、陕2ACMS和MICMS等。PolCMS是傅廷栋于1972年以现有的 细胞质雄性不育类型，其育性受一对显性恢复基因(Rfp)控制，存在于A染色体组， 记，并将Rfp定位到甘蓝型油菜的第18连锁群上；王俊霞等利用回交群体，找到了位于 记，其最小遗传距离为5．8cm。MICMS是傅寿仲等利用2个品种杂交后代选育的细胞质雄 性不育类型，其育性恢复由一对显性基因(Rfm)控制，对该基因的分子工作尚无研究报 道。本研究以优质杂交种宁杂1号的F2群体为基础，筛选与MICMS育性恢复基因Rfm紧 密连锁的RAPD标记，以期为恢复系的遗传改良提供辅助手段，并为进一步分离、克隆 MICMS育性恢复基因(Rfm)奠定基础。 1材料与方法 1．1试验材料 MICMS系统不育系宁A6、保持系宁B6及其恢复系宁R1，均由江苏省农业科学院经 济作物研究所提供。宁R1的基因型为RfmRfm，宁A6、宁B6的基因型均为rfmrfm。 1．2试验方法 1．21群体的获得及育性调查 利用不育系宁A6与恢复系宁R1杂交获得F。宁杂1号，自交获得育性分离群体R。 初花期按前期研究提出的4级分类标准逐株调查F2群体的育性级别，并将l～3级归为不 育株，4级为可育株，进行育性分析。 1．2．2DNA提取及PCR反应 参考李佳等提出的SDS法经适当修改后提取油菜叶片总DNA。参考Clark等提出的方 mmol／L 法进行PCR扩增。PCR反应体系为：1×Buffer，2．0 mmot／LdNTPs．1 MgCl2．0．2 UTaq酶(购自上海生工)，O．4 ffmol／L DNA，加ddH20至终体积20ra。扩增反应于MJPTC200梯度PCR仪上进行。热循环程序 廿蓝型油菜MICMS细胞质雄性不育恢复基因的RAPD标记 4％的琼脂糖凝胶上电泳，电压为3V／ 循环；72℃延伸10分钟；4℃保存。PCR产物在1 件计算特异条带的大小。 I．2．3集团构建及群体RAPD分析 在F2育性分离群体共159个单株中，根据育性调查结果，分别选取20个可育单株和 500条lObp随机引物对两个DNA池进行PCR扩增，存在多态性的引物经多次检验后，再 对R育性分离群体的各单株DNA样品逐个进行PCR扩增和电泳检测。 1 24资料分析 距，并作显著性检验。 2结果与分析 2．1 MICMS恢复基因的遗传分析 花期调查育性分离群体(宁A6／宁R1)F2各单株的育性表现，其可育株与不育株分 论分离比例，因此MICMS细胞质雄性不育恢复基因由一对显性基因控制，这一结论与前 期研究结果一致。 2．2集团问多态性引物的筛选 利用500条106p随机引物对可育和不育两个DNA池进行了PCR扩增，结果表明绝大 的多态性。其特异片段大小分别为238bp和380bp，标记为OPHI238和OPS73{{0，特异条带只 出现在亲本恢复系宁R1和可育DNA池的扩增产物中，因此，这两条RAPD片段所揭示的 特异DNA序列可能与育性恢复基因(Rfm)连锁。 图1 10bp随机引物对不育和可育两个DNA池的检测结果 2．3群体各单株的RAPD分析 PCR扩增，结果表明(图2、图3)，两条引物扩增产物中特异条带有无的比值分别为120： 39和113：46，均符合3：1的理论分离比例。 并且绝大部分可育株都表现为有OPHl。。和 OPS7380带型，仅有少数可育株表现为零带型 应是交换类型；绝大部分不育株都