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实训二 大豆磷脂的提取、分析及卵磷脂咀嚼片的的制备与检验 大豆磷脂的提取及含量测定 一、 试剂与仪器 1、试剂 ⑴ 氯化锌溶液：精确称取氯化锌6.86g，定容于500ml容量瓶中。 ⑵ 大豆市售 ⑶ 无水乙醇------10瓶 ⑷ 磁力搅拌器 ⑸ 对苯二酚溶液：取对苯二酚0.5g，加水适量使溶解，加硫酸1滴，加水稀释成100ml。 ⑹ 钼酸铵硫酸试液：取钼酸铵2.5g，加硫酸15ml，加水使溶解成100ml，即得。本液配制后两周即不适用。 取无水亚硫酸钠20g，加水100ml使溶解，即得。本液应临用新制。20％硫酸铵 ⒁ 羧甲基纤维素钠硅胶GF254G板 ，抽滤装置 二、实验操作 ㈠、大豆磷脂的提取及含量测定 1、5斤大豆用粉碎机粉碎得大豆粉 2、卵磷脂的提取 ⑴ 称取一定质量的大豆粉末，加入一定体积95%的乙醇，置于不同温度的水浴锅内，一定时间后取出，减压过滤。见下表 料液比 提取时间 提取温度 氯化锌 1:20 2.5 35 10 1:20 1.5 40 15 1:15 2.5 40 5 1:15 2 35 15 1:15 1.5 45 10 1:10 2.5 45 15 1:10 1.5 35 5 1:20 2 45 5 1:10 2 40 10 (2) 试验步骤：将溶有卵磷脂的乙醇溶液置于磁力搅拌器下，一边搅拌一边加入一定量ZnCl2溶液，继续搅拌20min;取出，减压过滤，并将滤液置于蒸发皿上蒸干;取出产品进行定性检测。 ㈡ 磷含量测定 标准溶液的制备：取105℃干燥至恒重的磷酸二氢钾约0.13g，精密称定，置100ml量瓶中，加水溶解并稀释至刻度，精密量取10ml置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，每1ml中含磷（P)约为30ug。 样品溶液的制备：取本品约0.15g，精密称定，置凯氏烧瓶中,加硫酸20ml与硝酸50ml，缓缓加热至溶液呈淡黄色，小心滴加过氧化氢溶液，使溶液褪色，继续加热30分钟，冷却后，转移至100ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。 测定方法：精密量取对照品溶液与样品溶液各2ml，分别置50ml量瓶中,各依次加入钼酸铵硫酸试液4ml，亚硫酸钠试液2ml与新鲜配制的对苯二酚溶液2ml，加水稀释至刻度，摇匀,暗处放置40分钟，照可见-紫外分光光度法,在620nm的波长处分别测定吸光度，计算含磷量。 硅胶薄层板的制备药匙，先用棉花过滤，以除去其中的沉淀不溶物(否则铺板有麻点)配好研磨均匀，注意不要有气泡，向一个方向研磨，然后用机械搅拌一段时间除去里面的气泡，再静半小时就可以铺板了将研磨均匀的硅胶倾倒于铺板器内，匀速拉过玻璃板铺板时，拉铺板器的速度不要过快，也不要太慢。将载玻片置于平台上，用药匙舀取糊状硅胶，均匀地铺在载玻片表面。铺板时，可以顺着板中间倒，也可以顺着某个边缘倒，也可以用玻璃棒引着溶液平铺在玻璃板上，倒时也要注意不要引入小气泡。如有需要，可以双手10个指头托住玻璃板，有节奏的颠簸，使得糊状硅胶分布匀称。50mg，加入2～3滴石油醚使之溶解， 3、照薄层色谱法，用毛细管吸取上述溶液于硅胶G薄层板上；以在氯仿：甲醇：乙酸：水(85：15：10：3， V/V)为展开剂，展开，取出，记录展开剂的前沿位置，晾干，记下展开剂的位置。 4、显色 向干燥的薄板喷洒20％硫酸铵(加入4ml浓硫酸)，直到薄板变得透明，在220℃下烘烤20min。 5、测算Rf值 溶质在纸上的移动速度率可用迁移率Rf值表示，Rf值主要决定于被分离物质在两相间的分配系数。在同一条件下，Rf值是个常数， 不同物质的Rf值不同，这一性质可作为混合物分离鉴定的依据。薄板显色成功后，对不同斑点进行Rf值测算。 6、层析结果 显色之后每块板上出现的点，其Rf值与文献值相比较，便可知每个点对应的磷脂。 文献中溶血磷脂酰胆碱、鞘磷脂、磷脂酰胆碱以及磷脂酰乙醇胺的Rf值分别约为0.1、0.2、0.4和0.9. 【注意事项】 1、点样基线距底边2.0cm，点样直径为2-4mm，点间距离约为1.5-2.0cm，点间距离可视斑点扩散情况以不影响检出为宜。点样时必须注意勿损伤薄层表面； 2、展开室需预先用展开剂饱和； 3、将点好样品的薄膜放入层析缸的展开剂中，浸入展开剂的深度为距薄膜底边0.5-1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封室盖，等展开至规定距离（一般为8-15cm）。 卵磷脂咀嚼片的的制备与检验 一、仪器及试剂 1、试剂 ⑴ 乳糖------------1000g ⑵ 淀粉 ---------------1500g ⑶ 微粉硅胶[二氧化硅（药用）] ⑷ 硬脂酸镁----500g ⑸ 卵磷脂粉----1000g（自制） ⑹ 维生素E--