HPLC法测定冬虫夏草菌粉及含片中腺苷的含量.pdfVIP

第28卷 第 2期 广西师范大学学报 ：自然科学版 Vo1．28 No．2 2010年 6月 JournalofGuangxiNormalUniversity：NaturalScienceEdition Jun．2010 HPLC法测定冬虫夏草菌粉及含片中腺苷的含量 俞青芬 (青海民族大学 化学系，青海 西宁 810007) 摘 要 ：采用 Kromasil—C18(4．6mm×250mm，5 m)色谱柱 ，以0．05mol／L磷酸二氢钾一甲醇 (90：10)为流 动相，流速为 1．0mL ·min_。，检测波长260am，柱温为 35。C，建立HPIC法测定冬虫夏草菌粉及含片中腺 苷的含量。实验结果表明，腺苷含量在 0．005~0．2tig(r=0．9993)范围内呈 良好的线性关系，平均回收率为 101．19％，RSD=1．45 一3)。该方法准确可靠、结果稳定、重现性好 ，可有效控制制剂的质量 。 关键词 ：冬虫夏草菌粉 ；含片；腺苷 ；HPLC 中图分类号：0652 文献标识码：A 文章编号：1001—6600(2010)02—0065—04 冬虫夏草ECordycepssinensic(Berk．)Sacc．]为麦角菌科真菌冬虫夏草菌在蝙蝠蛾科昆虫幼虫上的子 座及幼虫尸体的复合体，是中国特有的虫生真菌，是传统的名贵药材，它能补肾壮阳、易肺平喘、止血化痰 ， 可用于治疗多种疾病 ，如病后体虚、阳痿遗精、肾虚腰疼、健忘、肺虚咳喘等E¨。现代医学研究也证实，虫草 有祛痰平喘、改善肾功能、提高免疫能力、降血脂、调节性功能、抗衰老、抗癌[2]等作用。冬虫夏草的主要成 份为腺苷，2000版中国药典[4]及文献E53均采用高效液相色谱法测定腺苷的含量。但在实验 中采用上述 2 种方法检测，峰形对称性不好，严重拖尾且有一干扰峰。反相HPLC色谱法具有快速、准确、简单、精密度 高、重复性好、检出限低等优点，在中药材及其制剂有效成份分析检测方面有一定的应用潜力Es-。我们采 用 RP—HPLCD-lO3分离技术测定冬虫夏草菌粉及含片中腺苷的含量，方法具有快速 、准确、重现性好及样 品 前处理方法简单易行、回收率高等优点[1，为其质量鉴定和制剂质量控制提供 了理论依据 ，并可为含上述 藏药的制剂提供新的定量方法。 1 仪器与试剂 Agilent1100高效液相色谱仪 (杭州普惠科技有限公司)，配置手动进样器、在线脱气机 、高压二元梯度 泵、恒温柱温箱、DAD检测器，Agilent色谱工作站；KQ3200超声波清洗器。 腺苷对照品(购 自中国药品生物制品检定所)，水为 自制三重蒸馏水，甲醇为色谱纯，其余试剂为分析 纯。pH6．5的磷酸盐缓冲液：取0．01mol／L磷酸二氢钠 68．5mL与 0．01mol·L 磷酸氢二钠 31．5mL， 混合 ，调 pH6．5。 冬虫夏草菌粉、冬虫夏草含片 由青海月王青藏药业有限责任公司提供。 2 试验条件 2．1 供试品提取溶剂的选择 腺苷在水中溶解度最大，但以水为溶剂较难过滤，且 图谱峰形较难看，后经多次试验 ，采用 30％乙醇 为溶剂，超声提取L1。]30min即可基本提取完全。 2．2 检测波长的选择 取腺苷对照品溶液适量，利用DAD检测器在 200~400llm扫描其吸收光谱 ，结果显示在 260nm处 有最大吸收，故选择 260nm为检测波长 。 收稿 日期 ：2010—03—08 基金项 目：国家 自然科学基金资助项 目 通讯联系人：俞青芬(1975一)，女，青海乐都人，青海民族大学副教授。E—mail：yuqingfen0716@163．corn 66 广西师范大学学报 ；自然科学版 第 28卷 2．3 流动相的选择 我们实验 了磷酸盐缓冲~ (pH6．5)一甲醇(85：15)及不同体积比的0．05mol·L一磷酸二氢钾一甲醇 作流动相，结果发现，0．05mol·L 磷酸二氢钾溶液一甲醇(9O：1O)为流动相时，峰形及出峰时间适宜，为 最佳流动相。 3 试验方法与结果 3．1 分析溶液的制备