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2018-01-09 发布于浙江
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动物细胞培养在科研生产中的应用.pdf

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动物细胞培养在科研生产中的应用

动物细胞培养在科研、生产中的应用一、动物细胞培养在科研中的应用 POLD1基因表达受到抑制后对MCF-7 细胞的生长及周期的影响 Trizol提取MCF-7细胞总RNA 反义POLD1表达重组质粒pXJ41-as-POLD1的构建及鉴定细胞转染及稳定表达细胞株的筛选细胞生长曲线实验血清依赖性实验单细胞克隆形成实验软琼脂集落形成实验胸腺嘧啶核苷（TdR ）双阻断法同步化MCF-7细胞流式细胞光度术（FCM）进行细胞周期分析 Western blot鉴定转染细胞中特异性蛋白的表达论文题目：中心体蛋白centrin在人胚胃上皮细胞 GES1 的细胞增殖和癌化中的作用答辩人：陈娴指导导师：王永潮教授实验方法构建反义重组质粒转染细胞并筛选细胞株半定量RT-PCR （semi RT-PCR ）细胞生长活性测定细胞生长曲线测定血清依赖性实验平板集落形成率测定软琼脂集落形成比较流式细胞光度术（FCM）分析细胞周期细胞间接免疫荧光实验（IEF）免疫印迹实验（western blot ）细胞转染及稳定表达细胞株的筛选 GES1细胞G418筛选浓度的选择（300ug/ml）稳定表达细胞株的筛选 GAC1 GAC3 细胞生长曲线的测定 0.8 0.7 0.6 0 0.5 GES1 7 5 0.4 GAC1 D O 0.3 GAC3 0.2 0.1 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 时间（天）返回返回血清依赖性试验结果 0.5 0.45 0.4 0.35 GES1 10% 0 0.3 7 GES1 0.5% 5 0.25 D GAC1 0.5% O 0.2 GAC3 0.5% 0.15 0.1 0.05 0 1 2 3 4 5 6 7 时间（天）平板集落形成率的比较平板集落形成率的比较 60 50