空间环境对B16细胞侵袭和转移影响的体内外实验研讨.pdfVIP

空间环境对B16细胞侵袭和转移影响的体内外实验研究 柴大敏1 向青2 陆国玉1 武世伍1 徐梅2徐波2耿传营2房青2 李红艳2 陈志华2 陶仪声1 唐劲天3 1．蚌埠医学院病理教研室，安徽蚌埠，233003 2．中日友好医院临床研究所，北京，100029 3．清华大学，北京，100084 关键词 空闯科学B16细胞谤变侵袭转移 一、引言 重力、电离辐射、亚磁场，高囊空、超净环境以及航天器中的馓环境等，其中主要影响因素是馓重力和电 离辐射．众多国内外文献报道。搭载于空间飞行器中的微生物、植物种子、植物体、体外培养的细胞和动 已成功搭载3次，获得了大量的太空诱变单克隆细胞株啪．本次实验从搭载于“第20颗返回式卫星”的 选出免疫原性有所变异的细胞株． 二、材料和方法 (一)实验材料 1．肿瘤细胞株 44’I地面对照B16细胞株培养于。细胞低温长期生存系统”中．培养条件和实验组相同。 厶小鼠和动物模型的建立 只．每只小鼠分别注射0．2ml古5×105个实验组或对照组的细胞悬液。 (二)实验方法 1．侵袭实验 ·44‘ 细胞数．计算空间环境对肿瘤细胞侵袭的抑制率t 抑制率=塑坚驾麓辇麓勰碧必 2．划痕标记染科示踪技术实验 倒霞相差荧光显徽(0lypus 性，向邻近传递2～3列或3列以上则为阳性． 3．观察细胞株成瘤、生存期及转移情况 尾静脉接种组：接种20天后，乙醚麻醉．摘眼球取血．颈椎脱臼法处死小鼠．取肺．称重。固定于 本均4“m厚。计算肺转移抑制率． 抑辔率一(对照组肺转移瘸灶敷一实验组肺转移瘤灶数)／对照组肺转移瘸灶数 腹腔接种组t观察并记录生存朗． 4．统计分析 检验(秩和检验)处理。 三、结果 1．空间环境对B16细胞侵袭能力的影响 空间环境对33‘B16黑色索瘤细胞的侵袭和运动能力均有显著的抑制(见表1)． 囊l 空甸环境对B16蛔胞侵袭重蛆基雇脯能力的影响 ·々暑ls#与野生受比较PO．ol·与野生型比较PO．05． 2．划痕标记染科示技术检测细胞间通讯功能 如下图所示，经过空间诱变以后有的细胞株细胞问隙通讯功能增强．染料传输的细胞列数增多(见 图1、图2)． ·45· 圈1 44’细胞染料传输l～2列绷胞(十～++) 图2野生摄B16细胞染科传输1列细胞(一) 3．尾静脉接种组 包分斩，q检验．PO．05有统计学意义．(见袁2) 寰2空阀环境对肺转移■形成的影响 往l与野生曩相比较，弱’I土16蝈照·P(0．05．oPO．01． 文腹腔接种组 果如下(见圈3)t 捌3 荷癌小鼠生存期单因素方差分析(口检验)PO．05 ·46· s．免疫组化 以胞浆中存在棕黄色或褐色颗粒有无作为结果判断依据。根据染色有无分为阳性翔阴性。阳性细 按四点积分法lO：阴性Il：+l 2l++13{+++(见图4、图5和表3、表4)． 图4VEGF在最色寮窟中的表达(×z00) 图5 nm23在黑色素腐中的表达(×zOO) 囊3、rl粥F在转移■中的寰达 Hc=22．s689秩和检验螭朱，空阿诱变B16菩蛆与野生型相比较睬370外均具有筑计学意义(Po．05)． 四、讨论 空间环境不同于人类赖以生存的地球环境．空间生物学研究表明，傲蓖力可以引起生物细胞生理功 能显著变化，离子辐射改变生物细胞生长特性．空问复合作用更加易于诱发细胞变异o】．本课题组应用 ·47· 空间综合因素结合分子生