空气污染物TDI的雄性生殖毒性及作用机制研究.pdfVIP

持久性有机污染物论坛2006暨第一届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 空气污染物TDI的雄性生殖毒性及作用机制 季宇彬1，一，于蕾L2，郎朗1，一，李文兰1’2 (1．哈尔滨商业大学生命科学与环境科学研究中心，黑龙江哈尔滨150076；2．哈尔滨商业大学药物 研究所博士后科研工作站，黑龙江哈尔滨 150076；幸联系人，E—mail：jyb@hrbcu．edu．cn) 摘要：为评价空气污染物甲苯二异氰酸酯(toluene 性，观察了吸入染毒TDI后，雄性小鼠睾九组织的形态学上和酶水平的变化，以及对生殖细胞 RNA／DNA含量的影响．结果表明：在本实验染毒时间和染毒剂量范围内在本实验染毒时间和染毒 剂量范围内，TDI对雄性的生殖毒性主要表现为对各级生精细胞均有一定的毒性作用，作用的靶点 是细胞内的线粒体；TDI通过影响各种酶的活性，干扰了睾丸组织的有氧代谢和无氧供能，抑制 了细胞对能量的利用，损伤了各级生精细胞，导致生精上皮不可逆的损害，从而造成了其对雄性生 殖系统的损伤；TDI对雄性生殖细胞的核酸代谢以及DNA合成有一定影响．充分说明TDI在形态 学、酶和基因水平上对雄性生殖系统均具有一定的毒性作用． 关键词：空气污染物；甲苯二异氰酸酯；雄性生殖系统；毒性作用；机制 1引言 在经历了工业革命带来的“煤烟型”污染和“光化学烟雾型”污染后，最近一项专家研究报告 发现，现代人正步入了以“室内空气”污染为标志的“第三污染时期”[1】．因装修引起的室内环境 污染影响人民健康的问题越来越为人们所关注．世界卫生组织公布的《2002年世界卫生报告》中 明确将室内空气污染与高血压、胆固醇过高症以及肥胖症等共同列为人类健康的10大威胁．有关 资料表明，全球每年死于室内环境污染的人数达到280万，室内空气中检出300多种污染物，有约 68％的人体疾病与室内污染有判2’引．甲苯二异氰酸酯(toluene 氨酯材料的重要基础化工材料，主要用于生产聚氨酯树脂和聚氨酯泡沫，通过多种途径释放的TDI 会通过呼吸道进入人体，尽管浓度不高，但往往释放期比较长，故对人体是长期低剂量的危害【4～ 71．本实验组前期工作显示，反复多次接触高浓度的TDI，对动物产生一定的免疫毒性和遗传毒性 瞄~1…．到目前为止，有关TDI对雄性生殖系统的危害的研究甚少，因而本试验主要研究了TDI对 雄性小鼠的生殖毒性，并从形态学、酶水平、基因水平上对其毒性机制进行了探讨，为进一步研究 TDI吸入对人类生殖毒性作用及其机制提供科学理论依据。 2实验方法 雄性小鼠随机分为五组，采用50L的静式染毒罐对小鼠进行呼吸道染毒．连续染毒两周，每 天4h．根据报道【4J，TDI经呼吸道染毒的半数致死浓度(LC50)为9．7ppm／4h(相当于75。42mg／m3)， 设四个染毒剂量1／2LC50、1／4LC50、1／8LC50、1／16LC50．另设空白对照组(正常饲养)．染毒次日， 各组小鼠摘除眼球取血，离心后分取上层血清于全自动生化分析仪测定睾酮含量；并取睾丸组织， 盒说明操作．所得睾丸组织，一部分固定于10％甲醛溶液，石蜡包埋，切片，行HE染色，光镜观 察：另一部分固定于2．5％戊二醛，l％四氧化锇再次固定，环氧树脂包埋，乙酸双氧铀和柠檬酸铅 双重染色后于电镜观察．取双侧睾丸，加PBS研磨，离心去上清，胰酶消化，PBS洗，制成细胞 hi／1 悬液，涂于明胶板上，AO染色，37℃温育15min，倒置于激光共聚焦显微镜观察，使用488 氩离子激光激发荧光染料AO，在高倍镜(40x，)和7％中性滤光镜下进行检测．进入Z—Image程序， 激光沿Z轴扫描，获得细胞断层的扫描信息．每张标本，选取10个细胞，激光扫描共聚焦自动处 理得出RN～DNA的荧光像素之比，做统计学处理． 337 持久性有机污染物论坛2006暨第一届持久性有机污染物全国学术研讨会论文集 3结果与分析 3．1TDI对小鼠睾丸组织形态学的影响 光镜下显示：对照组睾丸的曲细精管管腔大小一致，管内各级细胞排列正常，从基底层至管腔 依次可见精原细胞、精母细胞、精予细胞，管内有成熟的精子，间质组织正常(见图1、图2)．TDI 的1／2LC50剂量组可见近睾丸被膜处曲细精管内各级精原细胞脱落、缺失，精子减少，细胞有轻 度固缩(见图3、