驴源干酪乳酸杆菌分离鉴定及生物学特性研究-中国畜牧业协会.PDFVIP

驴源干酪乳酸杆菌分离、鉴定及生物学特性研究 1,2 1,2 1,2* 2* 1 1 刘 宇 ，尹珺伊 ，江波涛 ，史同瑞 ，徐伟生 ，杨文忠 （1 黑龙江省三头驴农业科技有限公司，黑龙江 齐齐哈尔 161006； 2 黑龙江省兽医科学研究所，黑龙江 齐齐哈尔 161006） 摘 要：为了分离出可用于研发驴用微生态制剂的驴源乳酸杆菌。采集健康驴新鲜粪样2 份， 通过分离培养、形态特征、培养特性筛选出革兰氏阳性，厌氧，无芽孢杆菌 1 株。通过生化 试验鉴定和PCR 鉴定，确定该分离菌株为干酪乳杆菌，编号为LV1 。生物学特性研究结果表 明，干酪乳杆菌 LV1 安全，无致病性，适宜生长温度范围为 30℃～40 ℃，最适生长温度为 35℃～37℃，培养液初始 pH3～8 条件下均能生长。本研究为研发驴用乳酸杆菌微生态制剂 奠定了基础。 关键词：驴；乳酸杆菌；生物学特性；驴用微生态制剂 随着生活水平的提高和消费观念的转变，人们对自身健康和生态环境日益关注。众所周 知，驴产品具有极高的的药用、保健和营养价值，驴肉、驴皮、驴乳、驴脂等产品的需求量 日益增加。然而，国内外驴资源正在急剧下降，驴产品市场呈现供不应求的局面，这也对驴 养殖业提出了更高的要求。驴是草食家畜，饲草为主要日粮，喂量不足或饲喂质量较差的饲 草将影响驴消化系统功能、机体健康和生产性能，制约驴养殖业发展。 乳酸杆菌（Lactic acid bacteria ，LAB ）是动物肠道中的优势菌群和常在菌群，可发酵代 谢产生大量有机酸、消化酶、维生素、抑菌物质等，对维持动物肠道生态菌群平衡和消化机 能起着重要作用，将乳酸杆菌配合其他益生菌制成的饲用活菌制剂，在替代抗生素，预防和 治疗动物消化道疾病等方面具有良好应用前景。此外，通过乳酸杆菌的生物发酵作用，将富 含粗纤维的农作物秸秆，转变为优质的驴用生物发酵饲料，满足驴养殖过程中对大量饲草饲 料的需求，在提高驴生产性能同时，促进生物质资源利用。 本研究拟从健康驴肠道内分离乳酸杆菌，研究其生物学特性，为研发驴用微生态制剂和 驴用生态饲料，促进驴养殖业发展奠定基础。 1 材料与方法 1.1 材料 __________ [基金项目] 黑龙江省科技厅科技攻关项目 （NO. GC13B404 ） [作者简介] 刘宇（1982- ），男，黑龙江齐齐哈尔人，博士研究生，研究方向：兽医微生态学 *[通信作者] 史同瑞（1965- ），男，山东济宁人，研究员，研究方向：预防兽医学，E-mail ：systr@ 江波涛 （1965- ），男，山东海阳人，研究员，E-mail ：jbt999 @126.com 1.1.1 样品来源 前往黑龙江省三头驴农业科技有限公司驴场，无菌采集健康驴新鲜粪便2份，冷藏并迅速 送实验室进行细菌分离。 1.1.2 培养基 MRS 肉汤和MRS琼脂培养基购自北京陆桥技术有限责任公司，用于乳酸杆菌分离培养。 1.1.3 主要试剂 细菌微量生化反应管购自杭州天和微生物试剂有限公司，细菌DNA 提取试剂盒、 6×Loading Buffer、DL2000 DNA Marker均购自宝生物工程（大连）有限公司。 1.1.4 主要仪器设备 厌氧培养箱（YQX- Ⅱ型）、超静工作台（BCN-1360 B 型）、电热恒温培养箱（DRP-9272 型）、电热恒温水浴锅（DK-S12 型）、电子天平 FA1104 等。 1.2 方法 1.2.1 样品处理 将无菌采集的健康驴新鲜粪样置于盛有 50mL 灭菌生理盐水含玻璃珠的锥形瓶中。将锥 -1 -9 形瓶置于摇床，180r/min 振荡5min，然后进行10 倍系列稀释，自10 至10 ，共9 个稀释度。 1.2.2 菌株分离、染色和镜检 分别取适宜稀释度的粪样混悬液0.l mL 涂布于MRS 平板，37℃恒温厌氧培养24～48h 。 挑取各种不同菌落进行革兰氏染色，镜检，观察菌体形态。 1.2.3 菌株的纯化 挑取MRS 琼脂培养基平板上的疑似菌落进行纯化，纯化好的菌株进行菌落形态观察，并 描述各菌株