高效液相色谱pps.PPTVIP

一 色谱仪 四 液相色谱主要分离类型 第六章 高效液相色谱 4. 凝胶色谱（空间排阻色谱） M.W. tR 一 色谱仪 四 液相色谱主要分离类型 第六章 高效液相色谱 4. 凝胶色谱（空间排阻色谱） M.W. tR 一 色谱仪 四 液相色谱主要分离类型 第六章 高效液相色谱 4. 凝胶色谱（空间排阻色谱） M.W. tR 一 色谱仪 四 液相色谱主要分离类型 第六章 高效液相色谱 4. 凝胶色谱（空间排阻色谱） M.W. tR 一 色谱仪 四 液相色谱主要分离类型 第六章 高效液相色谱 5. 亲和色谱 原理：利用生物大分子和固定相表面存在的某种特异性亲和力，进行选择性分离。 先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。 一 色谱仪 四 液相色谱主要分离类型 第六章 高效液相色谱 5. 亲和色谱 先在载体表面键合上一种具有一般反应性能的所谓间隔臂(环氧、联胺等)，再连接上配基(酶、抗原等)，这种固载化的配基将只能和具有亲和力特性吸附的生物大分子作用而被保留。改变淋洗液后洗脱。 动画： 亲和色谱1、2 作 业 第六章 高效液相色谱 简要说明高效液相色谱法(HPLC的各类方法)的特点及 其分离原理。 2. 各种液相色谱检测器工作原理及其应用。 3. 简述六通阀进样器原理及其操作注意事项。 液-固色谱中硅胶固定相保留特性受哪些因素的影响？ 反相分配色谱法中化合物极性顺序ABC，以甲醇/水为流动相在C18柱上分离，其出峰顺序是什么？增加水比例，色谱峰有何变化？ 一 色谱仪 5. 示差折光检测器 二 液相色谱检测器 第六章 高效液相色谱 除紫外检测器之外应用最多的检测器；可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度呈正比，属于浓度敏感型检测器。 特点： 通用型检测器（每种物质具有不同的折光指数）； 灵敏度低，对流动相流量变化敏感，不适用于痕量分析； 对压力和温度变化很敏感，折光物质由于温度变化引起该物质密度的变化，进而导致折射率的改变。RID使用时温度变化要保持0.001℃范围内； 不能用于梯度洗脱，因为它对流动相组成的任何变化都有明显的响应，会干扰被测样品的检测。 结构分为：偏转式、反射式和干涉型三种。 动画：偏转式示差折光检测器 一 色谱仪 6. 蒸发光散射质量检测器 二 液相色谱检测器 第六章 高效液相色谱 HPLC的发展中受到限制的一个原因, 就是缺少象GC中的FID一样的灵敏、通用型的检测器。20世纪80年代后研制的蒸发光散射质量检测器给这一领域带来希望，并向具有真正通用型意义的检测器方向发展。即： 样品结构不需要具备紫外发色团和合适的折射率； 对梯度洗脱和流动相系统的温度变化不敏感； 对各种物质的响应因子很接近； 在一次分析中可以同时检测主要成分和杂质。 一 色谱仪 6. 蒸发光散射质量检测器 二 液相色谱检测器 第六章 高效液相色谱 ELSD的工作原理：经色谱柱分离的组分随流动相进入雾化器，被高速的载气流（氦气和空气）喷成一种薄雾。这些雾粒进入可控制温度的蒸发器（漂移管）中，使流动相气化蒸发，溶剂蒸发后剩下的不挥发组分成为微小的雾状颗粒，进入光散射室进行检测。光源光线经准直后成直角方向通过气流，然后被光阱捕集，以防止反射。蒸气状态溶剂通过光路时，光线反射到检测器上成为稳定的基线信号。云雾状溶质颗粒通过光路时，被位于入射光束1200角的检测器收集。 一 色谱仪 二 液相色谱检测器 第六章 高效液相色谱 流动相 雾化气体 雾化器 漂移管 雾化 蒸发 检测 一 色谱仪 二 液相色谱检测器 第六章 高效液相色谱 6. 蒸发光散射质量检测器 优缺点： 与示差折光检测器相比：灵敏度高；对流动相系统温度变化不敏感；可进行梯度洗脱。 与紫外－可见光吸收检测器相比：能解决最困难的HPLC检测问题。如磷脂、皂甙、糖类、聚合物、树脂等无紫外吸收或紫外吸收系数很小的化合物的检测；理论上可用于挥发性低于流动相的任何组分的检测，扩大了HPLC的应用范围； 减低流动相溶剂的纯度要求；无需测定定量校正因子；但灵敏度低于紫外检测器。 一 色谱仪 二 液相色谱检测器 第六章 高效液相色谱 7. 质谱检测器 目前质谱仪种类有： 磁偏转式质谱 四极杆式质谱(Q-MS) 离子阱式质谱 (IT-MS) 飞行时间质谱(TOF-MS)