含有融合标记基因和LoxP_FRT位点的植物表达载体构建及应用精选.pdfVIP

基因组学与应用生物学，2011 年，第30 卷，第4 期，第257-264 页 Genomics and Applied Biology, 2011, Vol.30, No.4, 257-264 研究论文 An Article 含有融合标记基因和LoxP/FRT 位点的植物表达载体构建及应用 朱友银1,3* 田晓娥1,2* 赵德刚1,2,3** 1 贵州大学贵州省农业生物工程重点实验室, 贵阳, 550025; 2 贵州大学生命科学学院, 贵阳, 550025; 3 贵州大学绿色农药与农业生物工程国家 重点实验室培育基地, 贵阳, 550025 * 同等贡献作者 ** 通讯作者, dgzhao@ 摘 要 本研究利用化学合成法合成了包含pCAMBIA0390 左右边界T-DNA 和LoxP/FRT (LF) 位点的 DNA 片段 ，利用 和 酶切位点，去除了pCAMBIA0390 左右边界T-DNA 和多克隆位点之间 Ⅰ Sac Ⅱ Sph Ⅰ 的序列，然后连接DNA 片段 和载体片段，构建了植物表达载体pGM323-LF-enTP 。随后，再合成含有适 Ⅰ 合在单子叶植物中表达的由玉米Ubi-1 启动子驱动的融合标记基因(Bar::gus)和水稻actin-1 启动子驱动 的 抗虫蛋白基因( )表达元件的DNA 片段 ，在pGM323-LF-enTP 的基础上，利用 和 Bt Cry1Ab Ⅳ Sal Ⅰ Pst Ⅰ 位点构建了同时含有LF 位点、 以及 基因表达元件的表达载体pGM626-LF-ABt 。利用含有 Bar::gus Cry1Ab pGM626-LF-ABt 的农杆菌遗传转化烟草和玉米，以草丁膦作为抗性筛选剂，非转化细胞得到了有效抑制， 快速获得了转基因植株，利用GUS 组织化学检测和RT-PCR 分析了转基因植株中标记基因的表达，结果 表明pGM626-LF-ABt 可以用于农杆菌介导的单、双子叶植物遗传转化。本研究为培育安全抗虫转基因植 物奠定了基础。 关键词 融合筛选标记, Bar::gus, 融合重组酶位点, LoxP/FRT, 植物遗传转化 Construction and Application of the Vector Containing the Bar::gus Fusion Gene and LoxP/FRT Recognition Site Zhu Youyin 1,3* Tian Xiaoe 1,2* Zhao Degang 1,2,3 ** 1 Guizhou Key Laboratory of Agro-Bioengineering, Guizhou University, Guiyang, 550025; 2 College of Life Science, Guizhou University, Guiyang, 550025; 3 Key Laboratory of Green Pesticide and Agricultural Bioengineering, Ministry of Education, Guizhou University, Guiyang, 550025 * The authors who contribute equally ** Corresponding author, dgzhao@ DOI: 10.3969/gab.030.000257 Abstract DNA fragment Ⅰcontaining T-DNA of pCAMBIA0390 vector and LoxP/FRT (LF) sites were synthe- sized with additional and recognition sites. Then the vector was released from pCAMBIA0390, and Sac Ⅱ Sph Ⅰ the sequen