亲和素在脂单层膜上的二维晶体研究.pdf

维普资讯 讲 谔屯 掘 第 40卷 第 2期 CHINESE SCIENCE BULLETIN 1995年 1月 ，／卜0。【 。 一 亲和素在脂单层膜上的二维晶体研究 ， 1 覃 宏 隋森芳 ／ (清华大学生物科学与技术系．生物膜 与膜生物工程 国家重点实验室。北京 10O084) 关键词 !!堕 苎 三纠 电子晶体学 月j，／月 … l 一 ／＼ ’ 生物大分子的二维晶体可以利用电子 晶体学 的方法进行结构分析 ]．利用脂单层膜对蛋 白进行二维结晶是一种 比较新颖 的方法 ．这一方法最早是 由美 国斯坦福大学 Kornberg教授 领导的实验室开创的目．亲和素是一种从鸡蛋清中提取的糖蛋 白．它和链霉亲和素在生物活 性上有着惊人的相似性．两者都 由4个等同亚基组成 ．每个亚基上有 1个 与生物 素分子结台 的活性部位 ．两者与生物素的结台都非常牢固，可以认为是一个不可逆的过程 ．亲和素是一 种碱性蛋 白，每个亚基上有 1个 N连接的寡糖链，而且寡糖链 的成分很不均一m．而链霉亲和 素是一个无糖基 的中性蛋 白．这些不 同使得亲和素的结 晶要 比链霉亲和素困难得多． 生物素是一种小分子化台物．当它和亲和素蛋 白结合的时候，只有头部的环脲基团直接 与 亲和素蛋 白分子发生作用 ．因此 ，人们可 以通过化学方法将生物素分子 的尾部和磷脂 的头部 耦连起来 ．这样形成的生物素化磷脂保持了与亲和素蛋 白特异结合的特性 ． 我们实验室经过多年的努力得到了亲和素蛋 白在生物素化的磷脂单层膜表面的二维晶 体，并通过对负染样品的电镜 图片的处理，对亲和素分子的结构傲了初步的分析． 1 材料和方法 生物素、生物素一N一羟基琥玻酸酯、二豆蔻酰磷脂酰乙醇胺 (dlmyristoylphosphatidyl ethanolamine，DMPE)、二棕 榈酰磷 脂 酰 乙醇胺 (dipalmitoylphosphatidylethanolamine， DPPE)、二豆蔻酰磷脂酸 (dimyristoylphosphatidy]acid，DMPA)都从 Sigma公 司购得 ． 二油酰磷脂酰胆碱 (dioeloylphosphatidylcholine，DOPC)从 AvantiPolarLipids公 司购 得 ．亲和素按 Green的方法从鸡蛋清中提取 ．两种生物素化的磷脂 (N—Biotinyl—dipalmitoyl— L一 一phosphatidylethanolam ine．B-DPPE；N—biotinyl-dimyristoylphosphatidy]ethanoamine． B-DMPE)按 Baryer的方法台成 ．亲和素蛋 白在生物素化的脂单层膜表面上二维有序化的 原理见图 1．首先在空气与水的界面上展开一层脂单层膜 ．脂膜 中含有生物素化的磷脂．这样 溶液中的亲和素蛋 白分子可以通过与生物素分子 的结合而被 抛锚 在膜表面上 ．在维持一定 的膜压力的情况下，结合在膜表面的亲和素蛋 白分子可 以通过侧 向的相互作用聚集形成规则 排列 的二维 晶体 ． 1994—04—22收稿 。1994-o8—13收修改稿 ·国家 八六三 ’计崩资助项 目 ·’联系人 维普资讯 第 2期 科 学 通 报 实验 中，为了节省样品用量，二维晶体是用 磷 脂单分 子层蔽 液滴法获得 的．先将蛋 白溶液滴在聚 四氟 乙烯 的小孔 中，然后在溶液表