同源重组置换衣藻叶绿体chlL基因及其同质化鉴定.pdfVIP

维普资讯 72-7f； ISSN 1007—7626 中国生物化学与分子生物学报 第 l6卷第 1期 CN 11387o／O Chin．J．Biochem．Mo1．Bio1．2000，Vo1．16，No．1，72～76 2000年 2月 同源重组置换衣藻叶绿体 chlL 基因及其同质化鉴定 钾弘 7j2 ． 莲旦量 2 苏 宁 张中林 钱凯先 ‘ (中11收亚科学簏生轴技术妍充中心，北京 100081}’浙江太学生轴技丰系，杭州 310027) 摘要 设计咀aadA基因置换衣藻f^ 基 因并作为转基 因衣藻筛选标记 ，将chlL基 因两侧的基因 片段 c P-trnL—petB—chlL5-3作为同源片段 ，构建衣藻叶绿体 同泺重蛆质粒p64D．通过改进的基 因枪法转化程序 ，将此质粒轰击八衣藻叶绿体．经抗 陛·筛选、暗培养厦 PCR、Southern—blotting等 中囤分类号 Q503，Q78 ReplacementofChloroplastchlL GeneofChlamydomonasvia HomologousRecombination andIdentificationofitsHomoplasmy FAN Guo—chang’”，SU Ning”，ZHANG Zhong—lin”，QIAN Kai—xian．SHEN Gui4ang”’ (”CenterofBiotechncdogy．ChineseAcademy撕 rlcult~ralScle~ tB ng 100081I 21Departm~tofl~iotechnology．Zr~fiangUniversity，Hangzhou 310027) Abstract Therecombinantplasmidp64D whichcontainedtheaadA geneasresistant-screening markertoChlamydomonastransformantsandc P—trnL-petB—c^L5一3 ashomologousfragment wasconstructed and transferred tO thechloroplastofC．7einhardtiibyan improved biolistic method．Thetransformantswereidenti／iedbyPCR．Southern—blottingafterselectingjnresistant medium andincubatinginthedark．TheresultsshowedthatthegreatpartotthecML structure genesinthech1oroplastgenomewerereplacedbyaadA gene． Keywords Chlamydomonaschloroplast，Homologousrecombination，chlL gene，aadA gene 光台作用对于人类 的生存和发展极为重要，如 的表达调控及机理 【]‘，国内则 尚少见有关这方面的 何提高光合作用效率，一直是人类追求的目标．到 目 研究报告．本文采用基因枪轰击方法，将带有衣藻叶 前为止，已阐明了10多种植物的叶绿体基因组全序 绿体chlL基 因两侧同源片段的质粒 p64D，导人衣 列_1]，但其中有些基因的功能还不甚清楚．因此需要