虫草多肽对小鼠免疫功能的影响研究.pdfVIP

动物实验 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 虫草多肽对小鼠免疫功能的影响 梁坚，何励，傅伟忠，苏爱荣，马宇燕，覃辉艳，谭宗艳，李凤文 (广西壮族自治区疾病预防控制中心，南宁530021) 【摘要】目的研究虫草多肽对小鼠免疫功能的影响。方法分别以41．7、83．3、166．6mg／kgBW剂量 的虫草多肽给小鼠连续灌胃30d，测定各项免疫指标。结果虫草多肽能提高小鼠的抗体生成细胞数和血清溶血 素水平，促进小鼠的单核一巨噬细胞碳廓清功能及腹腔巨噬细胞的吞噬能力。促进小鼠的迟发型变态反应，显 著提高小鼠的Nl(细胞活性。结论虫革多肽具有增强小鼠免疫力功能。 【关键词】虫草多肽；免疫功能；小鼠 虫草多肽为蛹虫草经过酶解工艺直接制得的蛹虫草水解物，经浓缩，干燥而成。蛹虫草又 名北冬虫夏草、北虫革，可寄生在鳞翅目、鞘翅目及双翅目等昆虫的蛹或幼虫体上。已有许多 研究认为，蛹虫草的化学成份与冬虫夏草无根本性差异，具有与冬虫草类似的功能，可作为冬 虫夏草的替代品n’23。本文以小鼠为观察对象，研究虫草多肽对免疫调节功能的影响。 l 材料与方法 1．1 材料虫草多肽：由常州某保健药品有限公司提供，规格为0。59／袋，人体日推荐用量为 BW。实验时取虫草多肽用蒸馏水分别配成2．08、4．17、8．33mg／taL浓度的溶液作为 8．33mg／kg 供试液。动物：清洁级昆明种健康小白鼠，由广西医科大学医学实验动物中心【批准号为：桂动 许字(2000)第001号】提供。本中心实验动物房合格证号：桂医动字第23003号。动物房温度； 22～25℃。相对湿度55～70％。主要仪器：全自动酶标仪、754紫外可见光分光光度计。 1．2 方法 昆明种雄性小白鼠336只，体重为1822克，供7项免疫试验用，每项试验4个 组，每组12只。虫草多肽设41．7mg／kg、83．3mg／kg、166．6mg／kg．BW3个剂量组，分别相当于 人体推荐用量的5倍、10倍、20倍，按0．2mL／lOgBW的容量给予虫草多肽溶液，另设一个阴 性对照组灌胃给予同体积的蒸馏水。每天一次，连续30d。末次灌胃lh后参照《保健食品检验 与评价技术规范》旧。中的方法对小鼠进行免疫功能的测定。 1．2．1 脏器／体重比值测定：试验结束处死动物，取小鼠胸腺、脾脏，称量后计算脏器／体重 比值。 脏器体重比值(％)=脏器重(g)／终体重(g)×100。 1．2．2 ConA诱导小鼠脾淋巴细胞转化试验(MTT法) 表示淋巴细胞的增殖能力。 1．2．3 二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应(DJm)(耳肿胀法) 40l 第七届中南地区实验动物科技交流会论文汇编 动物实验 于小鼠右耳攻击，24h后处死小鼠，取8m直径的耳片称重，左右耳重量之差表示DTH的程度。 肿胀度(mg)=右耳耳片重量(mg)一左耳耳片重量(mg)。 1．2．4 抗体生成细胞检测(Jerne改良玻片法) 末次给样前5d给受试小鼠每只腹腔注射0．2mL2％绵羊红细胞(SRBC)液进行免疫，5d后 处死，无菌取脾制成脾细胞悬液，按Jerne改良玻片法进行抗体生成细胞测定，用空斑数／106 脾细胞表示抗体生成细胞数。 1．2．5 血清溶血素的测定(凝集法) 末次给样前5d给受试小鼠每只腹腔注射0．2mL2％绵羊红细胞(SRBC)液进行免疫，5d后 从眼内眦取血分离血清用生理盐水倍比稀释，分别置于微量血凝板内，37。C孵育3h，观察血球 凝集程度，利用血球凝集程度检测溶血素(SRBC抗体)水平。血球凝集程度分5级。 抗体积数=(Sl+2S2+3S3……．nS。)’ 式中1、2、3-．．-n代表对倍稀释的指数，S代表凝集程度的级别。 1．2．6 小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验(半体内法) 末次给样后lh，给小鼠腹腔注射鸡红细胞悬液，注射后30min处死小鼠，腹腔注入2mL生 理盐水，取腹腔洗液制片，放37C培养箱内孵育30min，取出于生理盐水中漂洗后晾干，用l：l 噬细胞，每张片计数100个，观察记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数，被吞噬的鸡红细胞数。 吞噬百分率(％)=吞噬鸡红细