航天诱变水稻突变体遗传变异分子标记研究.pdfVIP

36 航天育种高层论坛论文选编 航天诱变水稻突变体遗传变异分子标记水 向跃武1 郑家磐水；tc 蔡平钟1水木 张志勇1 张志雄1 蒲志刚1 (1四川省农业科学院生物技术核技术研究所，成都610066， 2四川省农业科学院水稻高粱研究所，泸州646000，) 摘要 搭载“神舟四号”航天飞船的水稻纯合种子在返航后处理第三代种子颖壳变异为金黄色，其 它农艺性状无显著变异。本实验利用AFLP分子标记的方法，对航天诱变的突变体及原亲本进行基因组 对比分析，通过聚丙烯酰胺电泳寻找突变种(黄金1号)多态性DNA片段，经过一系列引物筛选，找 到了五条多态性DNA条带，对开展突变体基因功能研究和水稻杂种优势利用有十分重要的意义。 关键词航天诱变 壳色AFLP分子标记 水稻是最重要的粮食作物之·，世界上有三分之一以上的人口以稻米为主食。我国是世界水 稻生产大国，也是稻米消费大国，水稻栽培面积占粮食作物种植面积的三分之一、产量占粮食总 量的近一半。 mutation 航天诱变育种(Space—flightBreeding)是利用返回式卫星将农作物种子带上高空， 在微重力、高真空、强辐射和交变磁场等条件下…使其产生遗传变异，进而经地面选育出农作物 新品种的育种新技术。航天育种方法与常规育种的方法相比，有明显的优势和特点。部分品种的 变异频率高，变异幅度大，有益变异增多，大多数变异性状稳定较快，育种周期缩短；通过传统 育种获得一个新品种平均需要8—10年的时间，到5、6代才开始稳定，而航天育种则只需5年左 右的时间，在3、4代开始稳定…。另通过航天诱变单株间可出现一些有利的特殊突变体，用于基 因功能的研究十分有用，这是地面上其它理化因素诱变难于获得的。DNA标记是基因组分子水平 上遗传多态性的直接反映，它具有无表型效应、不受环境限制等优点。其中AFLP分子标记的原 理是植物基因组DNA经限制性内切酶双酶切后，形成分子量大小不等的随机限制性片段，将特定 的模板口]。PCR引物3’末端含有的选择核苷酸延伸到酶切片段区，这样就只有那些两端序列能与 选择核苷酸配对的限制性酶切片段被扩增。扩增片段通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分离检测。 AFLP标记具有简便、稳定、产率高的特点，已广泛用于种质资源的研究、遗传图谱的构建及基 因定位㈣。本文将AFLP标记应用于航天水稻突变体黄金l号分子标记研究的初步结果报道如下。 航天育种高层论坛论文选编 口1 1材料和方法 1．1供试材料 本实验所用供试材料来自四川省农科院生物技术核技术研究所的一个纯合稳定的育种材料 H9808B(茎、叶、颖壳均无色)，经搭载“神舟四号”飞船后在处理三代获得的一个除茎秆主脉 及颖壳呈金黄色的性状突变体一黄金1号(暂定名)。该突变体经连续三代自交观察均表现性状 稳定、整齐，经对其杂交、回交后代群体观察和统计，该突变体性状为一对隐性基因控制。将经 套袋自交获得的突变体种子及原亲本(对照)种子置于恒温培养箱暗培养7天，得到黄化幼苗。 1．2实验方法 1．21水稻幼苗总DNA提取 2％CTAB 至絮状沉淀出现；钩出絮状沉淀放于5rnl离心管中，加75％乙醇洗涤两次后倒置风干，加400ul TE 4。C过夜溶解；然后加10ul10mg／ml 干；加入适量TE过夜溶解MJ。 1．22 DNA浓度测定 用0．8％的琼脂糖凝胶检测样品，根据标样调整样品DNA浓度为100ng／ul。 1．Z3基因组DNA的酶切反应体系 每个DNA样品酶切的混合液包括：ddH20ll出，Y+／aANG洲B曲fer21．d(使用前振荡)，10raM 85℃，15m进行酶切反应。 1．Z4 DNA片段接头的连接反应体系 在1．2．3的酶切反应液中加入：ddH204．9出，Buffer 50pmol／山Mse胺头1．0止，10raMATPl．ova，10U／山T—ligase0．1出。于22℃连接10h，用 1．5％琼脂糖电泳。检测时紫外光下可见弥散条带，表明酶切、连接成功。 1．2．5DNA片段的预扩增反应体系 mix 取酶切连接产物5ul，PCR25山，ddI