12基因工程的基本操作程序_高二理化生_理化生_高中教育_教育专区.pptVIP

基因工程的基本操作程序 （1）目的基因的获取 （2） （3）将目的基因导入受体细胞 （4）目的基因的检测与鉴定 基因表达载体的构建 一、目的基因的获取 1、目的基因：P9 2、获取方法： （1）从基因文库中获取目的基因； （2）利用PCR技术扩增目的基因； （3）化学方法直接人工合成 （一）从基因文库中获取目的基因 基因文库 基因组DNA文库 cDNA文库 补：真核细胞、原核细胞基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 （二）利用PCR技术扩增目的基因 ① 概念： ③前提条件： 其他条件： ②原理： 变性 子链延伸 （三）化学方法人工合成目的基因 条件： 二、基因表达载体的构建 ——核心 构建基因表达载体的目的 基因表达载体的组成： a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位置作用 作用 三、将目的基因导入受体细胞 转化： （1）农杆菌转化法 ①感染特点： ②原理：Ti质粒上的T-DNA ③转化过程: 2.将目的基因导入动物细胞 （1）方法：显微注射法 （2）受体细胞：受精卵 常用法：Ca2+处理 微生物作受体细胞原因： 过程： Ca2+处理大肠杆菌 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA 3.将目的基因导入微生物细胞 思考：为什么要用Ca2+处理受体细胞？ 检测目的基因是否导入受体细胞 标记基因 1、检测转基因生物染色体的DNA上是否插入了目的基因 （1）方法: DNA分子杂交 （2）探针: 四、目的基因的检测与鉴定 放射性同位素标记的目的基因 提取转基因生物DNA 探针与提取的DNA杂交 杂交带 4、鉴定（个体生物学水平） 2、检测目的基因是否转录出了mRNA 3、检测目的基因是否翻译成蛋白质 抗虫、抗病接种实验、活性鉴定等 ①方法: 分 子 杂 交 方法: 抗原-抗体杂交 ②过程:探针和转基因生物的mRNA杂交,若出现杂交带,表明目的基因转录出了mRNA。 类型 步骤 检测内容 方法 结果显示 分子检测 第一步 目的基因是否插入转基因生物DNA上 DNA分子杂交 是否成功显示出杂交带 第二步 目的基因是否转录出mRNA 分子杂交技术 是否成功显示出杂交带 第三步 目的基因是否翻译出蛋白质 抗原—抗体杂交 是否成功显示出杂交带 个体 水平 鉴定 包括抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性以及抗性的程度； 目的基因的检测与鉴定 目的基因导入受体细胞后的检测