狼毒提取物对MDR-TB感染小鼠细胞因子的作用.docVIP

精品论文 参考文献 狼毒提取物对MDR-TB感染小鼠细胞因子的作用 胡娟1,2 陆军1 秦蕊1,3 叶松1 邓云1 （1安徽理工大学医学院 安徽淮南 232001；2连云港市第二人民医院 江苏连云港 222000)(3中国人民武装警察8720部队医院 江苏无锡 214063） 【摘要】目的 探讨狼毒提取物对结核病患者的耐多药结核杆菌（multiple drugs resistant bacillus tuberculosis, MDR-TB）感染小鼠免疫功能的调节作用。方法 采用MDR-TB菌液灌胃制备小鼠MDR-TB感染模型，将30只健康雄性小鼠随机分为3组，每组10只，正常组、模型组和狼毒提取物组，采用ELISA法检测小鼠血清中与结核细胞免疫密切相关的细胞因子IFN-gamma;、IL-4、IL-10、IL-12含量的变化。结果 狼毒提取物组小鼠血清中的IFN-gamma;含量为1.94plusmn;0.59 pg/mL、IL-4为6.15plusmn;1.44 pg/mL、IL-10为12.54plusmn;3.78 pg/mL、IL-12为2.89plusmn;0.75 pg/mL，与模型组比较，IFN-gamma;、IL-12含量明显升高，IL-4、IL-10含量明显下降（Plt;0.05）。结论 狼毒提取物可明显增强小鼠的细胞免疫功能，为临床应用治疗耐多药结核病提供了理论依据。 【关键词】 狼毒 提取物 MDR-TB 细胞因子 免疫功能 结核病是严重威胁人类健康的感染性疾病之一，曾一度得到控制。自20世纪80年代以来，因为滥用抗结核药物和艾滋病病毒（HIV）等感染而导致全球性结核病疫情回升[1]，耐多药结核分枝杆菌（MDR-TB）成为临床治疗的难点。狼毒（Stellera chamaejasme L.）具有治散播结，杀虫作用，临床上用于治疗肿瘤、结核病等，取得一定疗效[2-3]，但未见免疫机制研究的报道。本研究从细胞免疫学角度通过狼毒醇提取物对小鼠细胞免疫功能的影响，探讨其对MDR-TB治疗效果，为临床应用治疗耐多药结核病提供理论依据。 1 材料与方法 1.1 材料 IFN-gamma;、IL-4、IL-10和IL-12 ELISA双抗体夹心试剂盒（深圳晶美公司产品）；EXL808全自动酶标仪（美国Bio-Tek公司产品）；选用昆明种成年小鼠，体重（20plusmn;2）g，雄性，由安徽医科大学实验动物中心提供（动物合格证号：皖医实动准第01号）。 1.2 MDR-TB感染动物模型的建立 将安徽理工大学附属医院住院肺结核病人的痰标本接种结核分枝杆菌液体培养基（92-3 TB液体培养基），混匀后置37℃培养1～3周。将转种纯化后的MDR-TB菌落刮取，加无菌生理盐水磨菌制备成1mg/mL的菌液，经尾静脉分次注射2 mL菌量感染小鼠[4]。 1.3 中药提取物的制备 将狼毒中药粗粉，以水为溶剂加热回流提取，过滤，20%乙醇沉淀除去杂质，浓缩，冻干得水提取物；将同批次药材粗粉，以75%乙醇加热回流提取，浓缩，冻干得醇提取物[5]。 1.4 实验动物分组 将30只小鼠随机分为3组，每组10只。正常组每天正常标准饲料喂养；模型组生理盐水0.5 mL灌胃，再喂食标准饲料；狼毒醇提取物组灌服狼毒中药醇提取物，每天按照浓度200 mg/kg 0.5 mL灌胃，再加入标准饲料，连续4周，第4周后处死动物，收取血清（将血液3000 rpmtimes;20 min，取上清，灭活，过滤除菌）[6]。 1.5 ELISA检测 按照IFN-gamma;、IL-4、IL-10和IL-12的LISA双抗体夹心试剂盒说明进行操作，将待测样品150 uL分别加入到预先已用各抗小鼠IFN-gamma;、IL-4、IL-10和IL-12单克隆抗体包被的酶标板上；将反应板充分混匀后，37℃孵育120min，使标准品、待测样品中的抗原与单抗充分结合；洗板；每孔中加入生物素化的各一抗工作液50uL，37℃孵育60min；洗板；每孔加辣根过氧化物酶标记的Streptavidin抗体工作液100uL，37℃孵育60min，洗板；每孔加入OPD（邻苯二胺）底物工作液100uL，置37℃暗处反应5-10min；每孔加入1滴终止液（2mol/LH2SO4）混匀；采用酶标仪在492 nm处测各孔吸光度OD值，根据样品OD值在标准曲线图上计算出每ml血清中各细胞因子的含量。 1.6 资料统计分析 实验数据采用统计软件SPSS 12.0，所有数据均采用xplusmn;s表示，各组间比较运用单因数方差分析进行统计