十种中药成分对CEF增殖和抵抗NDV感染的影响研究.pdf

+种中药成分对CEF增殖和抵抗NDV感染的影响+ 胡元亮孔祥峰王德云刘家国张宝康 (南京农业大学中兽医学研究室江苏南京210095) 人参皂甙(GS)等十种中药成分加入到培养24 h的鸡胚成纤维细胞(CEF)中，再培养12h后接种新 城疫病毒(NDV)，于病毒接种后72 h用中性红染料吸收法测定CEF活性以评价各中药成分对细胞增殖 及其抵抗病毒感染的影响。结果表明，十种中药成分均能不同程度地促进细胞增殖和抵抗病毒感染．前 各有所长，且有一定的量效关系。 关键词：中药成分；细胞增殖；抗病毒作用 中药的治疗作用基于它的化学组成，多糖、皂甙和黄酮是关键成分，具有增强免疫、 促进细胞生长等多种作用”41。然而，对这些中药成分作用的强弱比较未见研究报道。笔者 提取了黄芪多糖(astragaluspolysaccharide，APS)、当归多糖(chinese rootpolysaccharide， raps)、蜂胶多糖(pr叩ohs flavone，AF)、淫 polysaccharide，PPS)、黄芪黄酮(astragalus 羊藿黄酮(epimedium flavone，PF)、黄芪皂甙 flavone。EF)、蜂胶黄酮(propolis 体外培养鸡胚成纤维细胞(chick fibroblast，CEF)的安全浓度【4】。本研究进一步运 embryo 用细胞培养的方法，测定了这十种中药成分对CEF增殖及其抵抗NDV感染的影响，旨在 探讨中药成分的免疫增强作用和机理，以筛选出免疫增强作用较好的中药成分，为研制新 型免疫增强剂提供理论依据。 1材料与方法 1．1中药准备 学研究室提供。根据对CEF安全浓度的测定结果嗍．用细胞维持液分别稀释成高、次高、 中、次低、低5种浓度(见结果中各表，单位p g／ha)，常规消毒后备用。 1．2病毒准备 disease 新城疫病毒(Newcastle +基金项目：国家自然科学基金资助项目 作者简介：胡元亮(1953一)，男，博士．教授，博士研究生导师。 半数组织培养感染剂量(TCID50)，用细胞维持液配成IOOTCID50浓度备用。 1．3试剂准备 MEM培养基．Gibco公司产品，按说明书配制，再加入犊牛血清达5％为细胞生长液、 2％为细胞维持液，再按常规量加入谷胺酰氨和双抗。胰蛋白酶，进口分装，用PBS(pH7．4) 配制成0．25％的溶液，0．22um混合纤维素酯微孔滤膜过滤除菌，分装后一20C保存备用： 的溶液。 1．4主要仪器 CO：培养箱，美国Revco公司生产；倒置显微镜，重庆光学仪器厂生产；酶联免疫检 测仪，华东电子管厂制造；96孔细胞培养板和24孔细胞培养板，德国Nunclon公司生产。 1．5试验方法 4／ml后加入到96孔细胞 根据文献5介绍的方法制备CEF，将细胞数调整至5×105 培养板中，每孔1001．t1，3TC、5％C02条件下培养至剐形成单层后．倒掉iL内液体，用 细胞维持液洗3次，开始分组加药。每种浓度的中药成分设8孔，每孔加入含中药成分的 细胞维持液100uI。培养12h待细胞成致密单层后，倒掉孔内液体，用细胞维持液洗3次， 1； 再均分为2组：中药．病毒组，4孔，每孔加入含病毒(100TCIDso)细胞维持液100u 中药组，4孔，仅加入细胞维持液。每两种中药成分(用同一块细胞板)同时设细胞对照 组，4孔，中药、病毒均不加；病毒对照组，4孔，不加中药、接种病毒；另设无细胞对 照孔，只加营养液，作为测定时的空白调