卫生监测 食品微生物检验.ppt

③菌落数的报告 菌落数100内时，按四舍五入修约，以整数报告，≥100时，采用二位有效数字，在二位有效数字后面的数值，第三位数以四舍五入方法修约；取前两位数字，后面用0代替，也可用10的指数表示； 若平板上为蔓延菌落无法计数，则报告菌落蔓延； 若空白上长菌，则实验失败； 称重以CFU/g为单位报告，体积取样以CFU/ml为单位报告。 报告 2食品中大肠菌群的测定 大肠菌群的定义:大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃24 h能分解乳糖产酸、产气、需氧和兼性厌的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。 国标法 国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。 乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养24±2h，观察是否产气。 分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。 证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。 报告：根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每100ml（g）大肠菌群的MPN值。 三、实验方法与步骤 1、采样及稀释 ①以无菌操作将检样25g（或25ml）放于含有225ml灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内（瓶内预置适当数量的玻璃珠）或灭菌乳钵内，经充分振摇或研磨做成1：10的均匀稀释液。固体检样最好用无菌均质器，以8000r/min～10000r/min的速度处理1min，做成1：10的稀释液。 ②用1ml灭菌吸管吸取1：10稀释液1ml，注入含有9ml灭菌生理盐水或其他稀释液的试管内，振摇混匀，做成1：100的稀释液，换用1支1ml灭菌吸管，按上述操作依次作10倍递增稀释液 * 食品微生物实验室 常用仪器及用途 洁净工作台（超净工作台、无菌台） 是一种供人操作的通用型局部净化设备，通过风机将空气吸入，经由静压箱通过高效过滤器过滤，将过滤后的洁净空气以垂直或水平气流的状态送出，使操作区域持续在洁净空气的控制下达到百级洁净度它可造就局部高清洁度空气环境。 生物安全柜 是为操作原代培养物、菌毒株以及诊断性标本等具有感染性的实验材料时，用来保护操作者本人、实验室环境以及实验材料，使其避免暴露于上述操作过程中可能产生的感染性气溶胶和溅出物而设计的。 高压灭菌锅 烘箱 培养箱 分光光度计 分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸，蛋白定量以及细菌生长浓度的定量 pH计 离心机 PCR仪 原理： 采用实时荧光PCR技术检测食品中是否有致病菌； 灵敏度： 对目标菌检测灵敏度为1个/g 效率： 检测过程用时2-4H 主要耗材： 各菌种试剂盒 真空泵 冰箱 纯水机 振荡器/均质机 移液器 其它仪器 食品微生物检验技术 主要内容 1.微生物检测作业规范 2.微生物检验流程 3.常见卫生指标及致病菌 4.测定微生物的大小 5.测定微生物的数量 6.菌落总数的测定 7.大肠菌群的测定 8.生产环境检测 无菌操作基本技术 用于防止微生物进入人体组织或其它无菌范围的操作技术称为无菌操作。 如外科手术需防止细菌进入伤口及各种微生物实验中,为了防止其它微生物影响实验的进行,也要在无菌的环境下进行。 无菌操作的要求是: 1 操作前将界面上的细菌和病毒等微生物杀灭 2 操作过程中是界面与外界隔离,避免微生物的侵入 一、在执行无菌操作时，必须明确物品的无菌区和非无菌区。 二、执行无菌操作前，先戴帽子、口罩、洗手，并将手擦干，注意空气和环境清洁。 三、夹取无菌物品，必须使用无菌持物钳。 四、进行无菌操作时，凡未经消毒的手、臂、均不可直接接触无菌物品或超过无菌区取物。 五、在操作前20～30分钟要先启动超净台和紫外灯，并认真洗手和消毒。在操作时，严禁喧哗，严禁用手直接拿无菌物品，如瓶塞等，而必须用消毒的钳、镊子等。倾倒平板应在超净台内操作，并且在开启和加盖瓶塞时需反复用酒精灯烧。对于吸管应先用手拿后1/3处，并用酒精灯烧烤之后再吸液体。 无菌操作原则 1、液体样品采样方法 充分混匀后，无菌操作打开包装，用100mL无菌注射器抽取,注入无菌盛样容器. 2、半固体样品采样方法 无菌操作打开包装，用无菌勺子从几个部位挖取样品，放入无菌容器。 3、固体样品采样方法 大块整体