瑞香狼毒对麦冬黑斑病菌的抑菌活性研究.docVIP

精品论文 参考文献 瑞香狼毒对麦冬黑斑病菌的抑菌活性研究 田仁君 江洪波 汤琴 (四川中医药高等专科学校 四川绵阳 621000) 【摘要】以麦冬黑斑病菌为供试菌,采用生长速率测定法和悬滴法对瑞香狼毒根中的提取物进行了生物活性测定。结果表明, 瑞香狼毒95%的乙醇提取物对黑斑病菌具有抑菌活性，对黑斑病菌的生长周期具有破坏作用，对黑斑病菌的孢子萌发具有明显的抑制作用。 【关键词】瑞香狼毒 黑斑病菌 抑菌活性 【中图分类号】R96 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）22-0369-02 瑞香狼毒，又名热甲巴，是一种不常用的中药材。主治清热解毒，消肿，泻炎症，止溃疡，祛腐生肌。现报道瑞香狼毒用于抗肿瘤，抗结核的治疗，取得了较好的效果[4-5]。同时瑞香狼毒对水果蔬菜的病虫害都具有很好的防治作用[1]。 但到目前为止，对中药材的杀菌活性几乎没有报道。近年来，中药材病害防治主要是化学农药，化学农药在中药材上的大量残留和抗药性对药品质量和环境产生了很大的影响，严重威胁着人类健康。而瑞香狼毒本身就是一种中药材，来于大自然，又回归于大自然，对环境无污染，对药材质量无残留。本文对瑞香狼毒提取物的抑菌活性进行了研究，为今后中药材的利用提供了更多的依据。 1、材料和方法 1.1 材料 瑞香狼毒根 买自四川若尔盖。将买回的瑞香狼毒根粉碎过40目筛，装入塑料袋密封后贮存于冰箱备用。 供试菌 采于校内未施药药用植物园内，取患了黑斑病的新鲜病叶，选择典型的单个病斑，无菌操作用剪刀从病斑边缘切小块病组织。用70%酒精浸2-3s，然后放入无菌水中漂洗3次。无菌吸水纸吸取水，移到配制好的萨市培养基上，27度左右恒温箱内培养后放冰箱备用。 供试仪器 旋转蒸发仪、恒温水浴锅、循环水多用真空泵、洁净操作台、摇床、恒温培养箱、压力蒸汽消毒器、游标卡尺、显微镜 供试药品 标准试剂(分析纯)、蛋白胨、葡萄糖、琼脂粉 1.2 方法 1.2.1 提取方法 回流提取法[2] 称取200g瑞香狼毒干粉于1000ml圆底烧瓶中，加入适量溶剂，加热回流1.5小时后过滤，滤渣再加入新的溶剂，加热回流提取。如此重复3次，合并3次提取滤液，浓缩至膏状分别得到95%乙醇提取物（EAE）、乙醇提取物、水提取物。 1.2.2 生物活性测定方法 药基法[3] 称取适量瑞香狼毒提取物，用丙酮稀释成一系列浓度梯度，取1ml 稀释液放入直径9cm 的培养皿内与9ml 融化好的培养基混合均匀制成药平板，设不加药为对照。待培养基冷凝后，放入培养箱中38℃挥发丙酮，2天后在每个不同浓度药平板上放入1个新生长一致的黑斑病菌的菌饼，将菌饼带菌丝的一面倒贴培养基表面，并做好标记。然后放入27℃的恒温培养箱培养，1天后开始观察、记录菌落生长情况和生长速度、菌落直径，并设空白对照组。用十字交叉法测每个菌落的两个直径，以其平均值代表菌落的直径，并在7天后测定菌落生长直径，测定菌落直径的增加值以不加药而加丙酮的对照菌落相比较计算样品不同浓度抑制菌丝生长率。每种提取物按上面的方法平行做3次，最后取平均值。 悬滴法[6] 将麦冬黑斑病菌接入100ml萨市液体培养基中，摇床中培养6d产孢，双层纱布过滤，取滤液得到孢子悬液。取5ml孢子悬液在小试管中，加5ml蒸馏水作为CK，将95%乙醇提取物依次稀释成50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625mg/ml，分别取5ml不同浓度药液与5ml孢子液混合制成含药的孢子悬液。在培养皿内放一“U”形玻璃棒，皿底加蒸馏水少许保湿，玻璃棒上放载玻片，其上分别滴1滴配好的孢子液，盖好皿盖，置于27℃温箱中培养，培养3小时后每3小时镜检孢子萌发情况，计算产孢抑制率。 2、结果与分析 2.1无水乙醇提取物对黑斑病菌的生物活性测定结果 表1 无水乙醇提取物对黑斑病菌的抑菌活性 试验中，以7天周期观察对菌丝生长抑制率作为生物活性指标，来评价提取物对黑斑病菌生物活性的强弱。从表1可以看出，瑞香狼毒无水乙醇提取物对麦冬黑斑病菌具有抑菌活性，当提取物浓度为1：320时显示有微弱的抑菌活性，当浓度为1：20时，对菌丝的抑制率可以达40.7，并且随着