基于气相色谱质谱联用技术的高通量细胞表型分析方法.PDFVIP

２０１７年１月 Ｖｏｌ．３５ Ｎｏ．１ Ｊａｎｕａｒｙ ２０１７ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ７５～７９ 邹汉法研究员纪念专辑（下） ·研究论文 ＤＯＩ：１０．３７２４／ ＳＰ．Ｊ．１１２３．２０１６．１０００４ 基于气相色谱⁃质谱联用技术的高通量细胞表型分析方法 １，２ ２，３∗ １ １∗ ２ 王希越 ，　 高　 鹏 ，　 连丽丽 ，　 娄大伟 ，　 许国旺 （１． 吉林化工学院，吉林 吉林 １３２０２２；２． 中国科学院大连化学物理研究所， 辽宁 大连 １１６０２３；３． 大连医科大学附属大连市第六人民医院，辽宁 大连 １１６０２１） 摘要：研究开发了一种基于９６孔板培养和气相色谱⁃质谱联用（ＧＣ⁃ＭＳ）技术的高通量细胞表型分析方法。 该方法 分别以４８种物质作为唯一能源对大肠杆菌进行培养，利用 ＧＣ⁃ＭＳ研究野生型和ｙｆｃＣ基因改造大肠杆菌对各物 质的分解代谢情况，实现高通量的细胞表型分析。 结果显示，野生型和ｙｆｃＣ基因过表达大肠杆菌对 １４种物质的 代谢能力有显著差异，ｙｆｃＣ基因过表达大肠杆菌对甘氨酸和柠檬酸的代谢能力明显强于野生型大肠杆菌，而对其 他物质的代谢能力较弱，我们推测可能是由于ｙｆｃＣ基因促进乙醛酸代谢，导致ｙｆｃＣ过表达菌株对甘氨酸的代谢 能力较强；野生型和ｙｆｃＣ基因敲除大肠杆菌间分解有显著差异的共 １６种物质，其中ｙｆｃＣ基因敲除大肠杆菌对丙 氨酸、乳糖、肌醇和柠檬酸的代谢能力较强。 该方法简单、高效，可以为未知基因功能研究提供更多代谢功能相关 的参考数据。 关键词：气相色谱⁃质谱；高通量；表型；基因功能 中图分类号：Ｏ６５８　 　 　 文献标识码：Ａ　 　 　 文章编号：１０００⁃８７１３（２０１７）０１⁃００７５⁃０５ Ｈｉｇｈ⁃ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｂｙ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｗｉｔｈ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ １，２ ２，３∗ １ １∗ ２ ＷＡＮＧＸｉｙｕｅ ，ＧＡＯ Ｐｅｎｇ ，ＬＩＡＮ Ｌｉｌｉ ，ＬＯＵ Ｄａｗｅｉ ，ＸＵ Ｇｕｏｗａｎｇ （１．Ｊｉｌｉｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｊｉｌｉｎ １３２０２２，Ｃｈｉｎａ； ２．Ｄａｌｉａｎ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ＣｈｅｍｉｃａｌＰｈｙｓｉｃｓ，ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙ ｏｆ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｄａｌｉａｎ １１６０２３，Ｃｈｉｎａ； ３．Ｄａｌｉａｎ ＳｉｘｔｈＰｅｏｐｌｅｓＨｏｓｐｉｔａｌＡｆｆｉｌｉａｔｅｄ ｏｆ ＤａｌｉａｎＭｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｄａｌｉａｎ １１６０２１，Ｃｈｉｎａ） Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ａ ｈｉｇｈ⁃ｔｈｒｏｕｇｈｐｕｔ ｍｅｔｈｏｄ ｆｏｒ ｃｅｌｌ ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｗａｓ ｄｅｖｅｌｏｐｅｄ ｂａｓｅｄ ｏｎ ９６⁃ ｗｅｌｌ ｐｌａｔｅ ｃｕｌｔｕｒｅ ａｎｄ ｇａｓ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ ｃｏｕｐｌｅｄ ｗｉｔｈ ｍａｓｓ ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｒｙ （ＧＣ⁃ＭＳ）． Ｆｏｒｔｙ⁃ ｅｉｇｈｔ ｍｅｔａｂｏｌｉｔｅｓ ｗｅｒｅ ｓｅｌｅｃｔｅｄ ａｓ ｔｈｅ ｓｏｌｅ ｅｎｅｒｇｙ ｆｏｒ ｗｉｌｄ⁃ｔｙｐｅ ａｎｄ ｉｔ