血凝块DNA纯化试剂盒说明书.DOCVIP

血凝块DNA纯化试剂盒说明书 产品组成 0次制备核酸纯化柱 2 ml离心管Buffer AT Buffer L1 Buffer L2 Buffer WA（浓缩液） Buffer WB（浓缩液） Buffer TE 说明书 0个 0个 l 1 ml 15 ml 16 ml 16 ml 12 ml 9.5 ml 12 ml 1份 ℃贮存。℃），可在两年内保持使用性能无明显变化；如果将产品储存于2~8℃，可延长产品的有效期至两年以上（2~8℃储存的产品使用前应先产品恢复到室温后再使用）。 技术支持 杭州新景生物试剂开发有限公司研发部：e-mail: technical@, 电话：400-0099-857。 产品介绍 本产品适合从中分离纯化DNA。经Buffer L结合到纯化柱上，降解的蛋白与PCR抑制物则过滤除去，DNA经Buffer WA和Buffer WB洗涤，用Buffer TE洗脱，即可用于各种分子生物学实验。 用户需自备的试剂与物品 无水乙醇 1.5ml离心管移液器及吸头（为避免样品间的污染，请选用含有滤芯的移液器吸头） 一次性手套及防护用品和纸巾 台式小量离心机（可配离心1.5ml离心管和2ml离心管的转子） 水浴锅和旋涡震荡器使用前准备 如果离心机有制冷功能，请将温度设置到25℃。将水浴锅温度设置到56℃，并将Buffer Buffer TE温育至56℃。根据试剂瓶标签上的指示在Buffer WA和Buffer WB中加入无水乙醇，并在标签的方框中打勾作好“乙醇已加”的标记。操作步骤： 1. 用手术刀切取150~200 mg血凝块，再用刀尖将血凝块剁成匀浆状，转移血凝块到一个1.5 ml离心管中* 必须将血凝块剁成匀浆状，方能充分溶解血凝块。 * 勿使用超过200 mg血凝块，否则将超出蛋白酶K的消化能力。 2. 根据血凝块的体积（按1 mg = 1 μl换算），补加Buffer AT至终体积为400 μl。 * 比如重量为160 mg的血凝块中，应加入240 μl Buffer AT。 3. 加入20 μl蛋白酶K贮存液， μl Buffer SP，旋涡振荡约15秒混匀4. 将 ml离心管置于56°C水浴0分钟。* 水浴期间每隔5-10分钟旋涡振荡秒。5. 加入300 μl Buffer L1，盖上管盖，旋涡振荡30秒。 6. 加入300 μl Buffer L2，剧烈摇晃离心管3~5次，再旋涡振荡30秒混匀。 7. 13000 rpm 离心5分钟。 8. 吸取750 μl上清液加入到核酸纯化柱中（核酸纯化柱置于2ml 离心管中），盖上管盖，12000 rpm 离心30秒。 9. 弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml 离心管中，在核酸纯化柱中加入500 μl Buffer WA, 盖上管盖，12000 rpm 离心30秒。 * 确认在Buffer WA中已经加入无水乙醇。 * 滤液无须彻底弃尽，避免粘附在离心管管口的滤液对离心机的污染2ml 离心管在纸巾上倒扣拍击一次。. 弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml 离心管中，在核酸纯化柱中加入600 μl Buffer WB, 盖上管盖，12000 rpm 离心30秒。 * 确认在Buffer WB中已经加入无水乙醇。 . 弃2ml 离心管中的滤液，将核酸纯化柱置回到2ml 离心管中，盖上管盖，14000 rpm 离心1分钟。 * 如果离心机的离心速度达不到14000 rpm，则用最高速离心2分钟。 * 请勿省略该步骤，否则可能因所纯化的核酸中混有乙醇而影响后续的PCR效果。 1. 弃2ml 离心管，将核酸纯化柱置于一个洁净的1.5 ml 离心管中，在纯化柱的膜中央加入100200 μl 56℃温的Buffer TE，盖上管盖，室温静置1分钟，12000 rpm 离心30秒。 * 如果离心机没有防泄漏的盖子，请将离心条件改为8000 rpm 离心1分钟，以免管盖脱落而损伤离心机。11. 弃纯化柱，洗脱的DNA可立即用于各种分子生物学实验；或者将DNA储存于-20℃备用 地址：浙江省杭州市西湖科技经济园金蓬街366号1幢东4F 邮编：310030 电话：0571传真：0571 仅供科研使用，请勿用于人体及动物的治疗或临床诊断。 Ver.2