双孢蘑菇子实体原基与菇营蛋白质表达变化分析研究.pdfVIP

食用菌学报@2012．19(3)：15~20 文章编号 ：1005—9873(2012)03—0015—06 双孢蘑菇子实体原基与菇营蛋 白质表达变化分析 陈美元 (福建省农业科学院食用菌研究所 ，福建福州 350014) 摘 要 ：为探讨双孢蘑菇 (Agaricusbisporus)子实体发育初期 的蛋 白质 表达变化 ，采用双 向电泳 (two— dimensionalelectrophoresis，2-DE)技术对双孢蘑菇As2796子实体原基与菇蕾的蛋 白质组进行分析，发现 14 个表达差异明显的蛋 白质 。经质谱分析(MALDI．T0F／ToFMS)和数据库检索，鉴定到 1O个差异蛋 白质 ，其 中乙醇氧化酶与醇类代谢相关，磷酸烯醇式丙酮酸水合酶与能量代谢相关，蛋 白酶体、5一甲基 四氢三谷氨酸-同 型半胱氨酸 甲基转移酶、维生素 B。不依赖型 甲硫氨酸合成酶、1一吡咯琳-5-羧酸脱氢酶、NADP依赖 的谷氨酸 脱氢酶与氨基酸或蛋 白质代谢直接相关 ，而 WD40重复蛋 白、肌动蛋 白、热激蛋 白7O则与细胞 内多种生物过 程有关，在细胞的生长发育分化等过程中起着重要的作用；其余 4个仅在双孢蘑菇蛋 白质组中鉴定到功能未 知的蛋 白质 。 关键词：食用菌；蛋 白质组；双向电泳；质谱分析；蛋 白质鉴定 近年来食用菌生长发育机理研究发展迅速， 育密切相关的蛋白质 ，为双孢蘑菇子实体发育机 取得 了许多研究成果。已报道 的食用菌发育机 理的研究提供参考 。 理的研究主要包括 ：环境条件 、培养基质、有益微 l 材料与方法 生物对食用菌发育的影响、菌丝与子实体营养成 分的变化 、发育相关酶学研究 以及发育基 因研究 1．1菌株 等方面_l1]。对于双孢蘑菇 (Agaricusbisporus)的 双孢蘑菇 (A．bisporus)杂交菌株 As2796 研究 ，主要是其发育及成熟过程 中的疏水蛋 白基 由福建省农业科学院食用菌研究所种质资源与 因 hypAr2。]、子实体原基 的超微结构特征r4]、不 遗传育种研究室保藏并提供。 同发育阶段 的尿素与脲酶含量及脲酶基 因的表 1．2试剂 达水平_l5等。 等电聚焦 IPG预制胶条 、40％丙烯酰胺．甲 蛋 白 质 双 向 电 泳 (two．dimensional 叉双丙烯酰胺 (37．5：1)溶液、载体两性 电解质 electrophoresis，2．DE)是多年来蛋 白质组学研究 Bio．Lyte为 BioRad公司产品；尿素、3．[(3．胆酰 的主要方法 ，在食用菌研究 中也得 到一定 的应 胺丙基)二乙胺]．丙磺酸 (CHAPs)、二硫苏糖醇 用_l6．13]。在食用菌发育机理的蛋 白质组学研究方 (DTT)、十二烷基磺酸钠 (SDS)、甘氨酸 、四甲基 面 ，SAKAMoTo等研究 了金针菇 (Flammulina 乙二胺 (TEMED)、考马斯亮蓝 G．250为 BBI公 veIutipes)光照及低温刺激下菌盖形成 的差异蛋 司产品；Bradford蛋 白质定量试剂盒及其它试 白质组_7]，刘靖宇等应用 iTRAQ标记结合二维 剂均购 自上海生工生物工程服务有限公司。 液相色谱 串联质谱技术对草菇不 同生长发育阶 1．3取样 段的差异蛋白质组进行了研究E14,15]，其它食用菌 As2796菌株进行常规栽培管理m]。在子实 包括双孢蘑菇在这方面的研究未见报道 。笔者 体原基 (直径约 2mm)阶段和菇蕾 (直径约 应用 2．DE技术 ，对双孢蘑菇子实体原基与菇蕾 6mm)阶段进行取样 ，第一潮和第二潮子实体样 蛋 白质表达差异进行分析 ，以期发现与子实体发