辣椒细胞质雄性不育育性恢复基因的RAPD标记研讨.pdfVIP

摘 要 本研究以辣椒细胞质雄性不育系为母本，恢复系为父本，通过杂交所得 F,经隔离自交后得到的F2群体为材料，经过对F2群体的115个单株育性鉴 定后，挑选典型的雄性不育植株和雄性可育植株各10株，用BSA法构建雄 性不育基因池和育性恢复基因池，利用RAPD技术对辣椒细胞质雄性不育育 性恢复基因进行标记，主要取得如下结果: 1.通过对RAPD反应程序和体系进行优化，建立了一套适合辣椒的稳定的 RAPD反应体系。该RAPD扩增反应程序为:94C5min(预变性)，94℃变 性1min,360C退火1min,720C延伸2min(40个循环);720ClOmin(延f申反 应)，然后4℃保存。反应体系总体积为25pL，由2.5pLbuffer(10X)缓冲液， 0.4p1dNTPs(IOmmol/gL),1.OpL随机引物(5pmol乍L),0.2pLTaq酶 (SU/pL)，2pLMg2(25mmo/lpL),4pL模板DNA(5ng/pL)和14.9pL灭菌 双蒸水组成。 2.利用Operon公司生产的IObp寡聚核葺酸随机引物进行RAPD扩增检测 雄性不育和育性恢复基因池的多态性，共筛选了320个随机引物，得到1个 多态性引物OPV-02，扩增出OPV-02100。特异DNA谱带。 3.用多态性引物OPV-02对