武昌獾蛛种群内遗传变异的分子检测与分析.PDFVIP

蛛 形 学 报Acta Arachnologica Sinica，Nov．2005，14(2)：89—94 ISSN 1005—9628 武昌獾蛛种群内遗传变异的分子检测与分析 罗育发h 颜亨梅 ( 湖南师范大学生命科学学院，长沙 410081；。赣南师范学院化学与生命科学系，赣州 341000) 摘 要：采用外生殖器结构特征和RAPD分析相结合的方法，从2个层次研究分析了武昌獾蛛Trochosa wuchangensis自然种群的种内遗传差异性。2种方法的结果一致表明武昌獾蛛的自然种群内存在变异，即使 同一地理种群的武昌獾蛛也有多种变异类型，且该种内变异并不完全是因分布地域不同而产生的。用这2种 手段在对其雌性成体进行研究时发现可明显分为3大类型，以武昌獾蛛外生殖器结构为鉴定依据，这3大类型 分别为：(1)两垂兜间合抱部分梨形，长≤宽；纳精囊远端分叶时内叶稍短于外叶。(2)两垂兜间合抱部分梨形， 长宽；内叶明显短于外叶。(3)两垂兜间合抱部分窄长，长宽．夕 叶明显细。用武昌獾蛛雌性成体的外生殖 器结构特征为依据划分的这3种类型与依据其RAPD谱带特征所进行的类型划分基本一致。对1型和2型内 个体间的遗传相似度进行方差分析表明，2型内个体间不存在显著差异，但1型内个体间存在显著差异(P 0．05)。研究还表明性别不同的武昌獾蛛成体的RAPD谱带也有差异，用随机引物S。。扩增的253 bp的片段为 雄性武昌獾蛛的种的特异性片段。不同生长发育期的武昌獾蛛也存在种内遗传差异，引物S。。和S。 对不同生 长发育期的武昌獾蛛样本的RAPD扩增中就显示其相互间存在不一致的谱带特征。经统计分析发现成熟个 体的谱带类型稳定，变化较小；未成熟个体的谱带类型不稳定，差异较大。 关键词：武昌獾蛛；种内变异；RAPD 武昌獾蛛Trochosa wuchangensis是蜘蛛目Araneae狼蛛科I ycosidae中较活跃的类群。有关蜘蛛目 中的种内变异研究，仅尹长民(2001)初步探讨了蜘蛛外生殖器结构的变异类型。本文将RAPD技术作 为种内变异研究的一种手段，从分子水平上去判断武昌獾蛛种群内个体间的差异类型和差异程度、种内 性别差异以及物种内不同生长发育期遗传物质间的差异所产生的分子机制，以弥补仅依据形态特征进 行种内变异研究时所存在的不足。在学术上可以丰富蜘蛛种群遗传学内容。 l 材料与方法 1．1 实验材料及预处理 武昌獾蛛的01~09号标本及5个雄性标本均采集于湖南长沙；10～16号标本采集于湖南石门壶瓶 山；17～24号标本采集于湖南岳阳。均系作者于3～4月期间，采于3个地区的农田和自然栖息地，标本 数见表1。 表1 武昌獾蛛不同生长发育期的个体数 Table 1 The total number of Trochosa wuchangensis of different growth periods 采的活体标本均带回室内不给食物只供水饲养1个月以上，之后取其附肢置入75 酒精的培养皿 中30 rain以上，再取出用灭菌单蒸水反复冲洗后用于基因组DNA的提取。每个个体在去除附肢后的剩 余躯体部分保存于80 的酒精中。根据其外生殖器结构进行鉴定、描述与类型划分。 - 通讯作者(Corresponding author)：E—mail：yanhengmei@yahoo．com．an 收稿日期(Received)：2005—06—24 国家自然科学基金(No和湖南省自然科学基金(No：01 JJY2026)资助项目 转载 中国科技论文在线 90 蛛形学报Acta Arachnologica Sinica 14卷 1．2 武昌獾蛛种内形态变异 取已被摘除步足供RAPD分析的武昌獾蛛剩余部分进行形态变异研究。先摘下外雌器，剥除肌肉， 置乳酸中使其透明后，在Olympus体视显微镜下采用4×20放大倍数观察，并绘制外生殖器内部结构 (