人源性抗TNFα小分子抗体的改构和分析.pdfVIP

生 物 化 学 与 生 物 物 理 学 报 ， （）： !# !#$$%#% ’()’ *+,(-+.+(’ /0 *+,1-23+(’ 3+4+(’ $!!5 %% 5 5 6 7 # 85958!!: ; 人源性抗 ’#(!小分子抗体的改构和分析 陈 萍5 陈常庆$ ! 药立波5 韩 骅5 苏成芝 5 5 $ （ 第四军医大学生物化学与分子生物学教研室，西安 5!!8$； 中国科学院上海生物工程研究中心，上海 $!!$88 ） 摘要 在获得人源性抗人 单链抗体（ ）基因序列的基础上，对 的连接肽部分进行基因改造，并构 )49! 3DL 3DL 建了 ?J 抗体基因。改构前后的 !#$ 分别重组入表达载体 M*N$$!，经 =$ O 热诱导，在 % ’() P- 中表达了3DL ! 蛋白，得到分子量约为 8! QP 的重组蛋白质，改构前后 3DL 的表达量分别 占菌体总蛋白质的7 K R 和58 K #R 。同时 构建 #*+ 可溶性表达载体并转化非抑制型菌株 -*$55，经 +1)S 诱导，在约 ! QP 分子量处呈现一条新生蛋 白质 条带。从大肠杆菌裂解液中对 3DL 进行了复性和层析纯化，对 #*+ 基因的表达产物进行了亲和层析纯化，并证 实：（）改构后 在大肠杆菌中的表达量有所提高；（）改构前后的 与 均具有与 相结合的活性， 5 3DL $ 3DL ?J E)49! = 6 5 具有 连接肽的 与 的亲和常数为 （ ） ，而改构后具有（ ）连接肽的 SSSS3 3DL E)49! 7 K ! T 5! AU: V SSSS3 8 3DL 6 5 6 5 的亲和常数提高为 （ ） ， 与 的亲和常数为 （ ） ， 与改构后 的亲 K$ T 5! AU: V ?J E)49! K75 T 5! AU: V ?J 3DL 和力无明显差异；（） 与 均有中和 细胞毒的作用，具有（ ）连接肽的 与 的中和活 8 3DL ?J E)49! SSSS3 8 3DL ?J 性基本相同，但均明显低于一株鼠源性单抗。 关键词 肿瘤坏死因子 ；人源性 3DL 抗体；人源性 ?J 抗体；表达；亲和力 ! ［］ 肿瘤坏死因子 （ ， 竞争效应 # 。 !0WAUI F/DIUHBH X?D0UI ?ME? )49 ）是一种多功能细胞因子。虽然 )49 具有诱导体 为了得到能够有效中和 )49 活性并适于临床 ! !