生理实验教学（吉林大学）坐骨神经腓肠肌标本制备及不同强度和频率刺激对.docVIP

吉林大学国家级生物实验教学示范中心实验报告 姓名：王楠 课程:生理学 题目：坐骨神经腓肠肌标本制备及不同强度和频率刺激对 肌肉收缩的影响 学号时间：13.11.6 成绩： 教师签字： 实验目的 1、学会坐骨神经腓肠肌标本的制备 掌握制备标本的基本操作技术， 掌握蛙类手术器械的使用方法。 2、观察骨骼肌收缩性质 不同刺激强度时骨骼肌收缩的反应， 不同刺激频率对骨骼肌收缩形式的影响。 学习微机生物信号采集处理系统的使用 实验原理 一个刺激是否能使组织发生兴奋，不仅与刺激形式有关，还与刺激强度、刺激时间、强度－时间变化率三要素有关。 骨骼肌由许多肌纤维组成，刺激强度不同，肌纤维的兴奋性不同，随着刺激强度的增加，收缩强度也增加，当所有的肌纤维都兴奋时，再增加刺激强度，收缩强度也不会再增加。在一定范围内，肌肉收缩幅度与刺激强度成正相关。 (a) 单收缩（twitch）:骨骼肌在受到一次阈上刺激后产生的收缩。 (b) 不完全强直收缩（incomplete tetanus）：后一刺激引起的肌肉收缩落在前一刺激引起肌肉收缩曲线的舒张期时，表现为锯齿状收缩波，产生不完全性强直收缩 。 (c) 完全性强直收缩（complete tetanus）：后一刺激引起的肌肉收缩落在前一刺激引起肌肉收缩曲线的收缩期时，则骨骼肌处于持续的收缩状态，锯齿波消失，产生完全性强直收缩 。 实验材料和仪器 动物 蟾蜍 器材 蛙板、剪刀、镊子、探针、玻璃分针、神经标本盒、铁支架、微调固定器、张力换能器、计算机、RM6240C生物信号采集处理系统。 药品试剂 任氏液（由无机盐和蒸馏水配置而成，任氏液的理化特性与蛙的组织液近似。可用于蛙的组织、器官润湿和营养） 实验步骤 步骤 现象 双毁髓（脑、脊髓）； 左手握蟾蜍,用拇指按压背部，用食指下压头部前端使头前俯。右手持探针由枕骨沿正中线向脊柱端触划，当触到凹陷处即枕骨大孔. 将探针由此垂直刺入,然后将针折向前插入颅腔并左右搅动，捣毁脑组织。 而后退针至皮下，针尖向后刺入椎管并左右搅动以破坏脊髓。 当蟾蜍四肢松软、呼吸消失则表示脑脊髓被完全毁坏，否则应按上法重复操作。操作过程中要防止毒腺分泌物射入眼内。 （处理蟾蜍标本时，小心蟾酥溅入眼内） 毁脑髓的时候还是比较顺利的，虽然最开始扎的比较费劲，总怕扎穿青蛙扎到手上，但是扎进去后就遇到了硬硬的骨头，看来扎到手是完全不用担心了。而且很容易就找到了颅腔，真的很大，能听见杀蛙针刮颅腔的声音。 毁脊髓的时候做的还是比较费劲的，隐约能触碰到所谓的窄窄的脊髓管，但是还是扎不进去，最后是老师帮着毁了一下。据说是脑髓控制下肢，脊髓控制上肢。有的时候毁完了它还会动，我感觉没关系。因为我觉得毁脑髓主要是为了杀死蟾蜍，最后反正是要把上半身剪下去的，也就无所谓了。毁脊髓呢，相对重要一些，主要是怕影响后来的电脑对它的刺激，但其实最后要将脊髓剪成两半，到时候再弄弄其实也没有什么影响。 去下肢皮肤； 腰部皮肤环切，左手夹住脊柱端(注意镊子不要夹住或触及坐骨神经)，右手捏住皮肤边缘，向下剥掉后肢的皮肤 环切皮肤还是比较容易的，但是扒皮就很不爽了，很难扒。开始将皮拽到腰部还可以，自从拽到了腿就感觉追不动了，蛙的上身根本不敢使劲捏，感觉一使劲蛙就要被捏碎似的，腿的和脚的特别不好拽。后来脚上的皮肤我就留着了，直接将剩下的皮肤剪了下去。 去掉内脏、上肢、头； 看到神经丛，在神经丛上缘用粗剪刀剪断脊柱,并将头和前肢及内脏一并剪去。 把皮肤剪开，肠子内脏什么的都剪断，最后露出了脊髓，从下往上数大约4-5节，剪断。 分开两腿； 用粗剪刀纵向剪开脊柱(注意勿损伤坐骨神经)，并从耻骨联合中央剪开两侧大腿。将分离的标本浸于盛有任氏液的培养皿中。 将青蛙剪成两半时两腿中间的骨头挺不好分开的，不太容易对正下剪，需要使劲剪开。脊髓剪成两半还是比较容易的。 在大腿部找到坐骨神经； 腹面向上,用玻璃分针沿脊柱旁游离坐骨神经； 背面向上，循坐骨神经沟(半膜肌与股二肌间的裂缝处),找出坐骨神经大腿段; 玻璃分针轻轻勾起，剪断其所有分支并一直游离至膝关节后侧。 最开始我是先剥离的肌肉中的坐骨神经，没有先剥离脊柱旁的，这是一个比较失误的地方，我在第二次做的时候才是先剖离脊柱旁的，这是实验快速容易的多。神经还是比较粗的，其实并没有那么容易坏。 剪去脊柱骨，只保留发出坐骨神经的脊髓节段，剪去大腿部分的肌肉，保留膝关节与部分股骨； （股骨要保留一部分（2/3），脊柱保留一段） 没用的地方就是要大胆的剪，第一个标本我剪得不是太彻底，第二个就很好了。 跟腱下穿线并结扎跟腱，游离腓肠肌； （分离神经时，避免手、