发酵制备乙醇过程的模拟优化与性能监控研究 (1)研究.pdfVIP

The ofsolvent—stable producedbyorganic study protease Bacillus YPl solvent—tolerant licheniformis N ■■■『-■■■■■■■■■■盯k■■，y o r一，七，}陪h罩 ， ’l 0 摘要 耐有机溶剂极端微生物在双相生物催化转化、环境生物修复、极端酶系开发 等领域具有重要用途。耐有机溶剂极端微生物所产生的天然耐有机溶剂酶系如蛋 白酶及酯酶在有机溶剂中对某些手性化合物表现出高度的立体选择性，使它们在 手性化合物的拆分及催化合成等方面显示出广阔的应用前景。本论文根据耐有机 溶剂极端菌产生天然耐有机溶剂酶系的研究现状，将研究重点放在耐有机溶剂极 端菌的筛选、高强度耐有机溶剂蛋白酶产生菌的筛选及生物学特征、耐有机溶剂 蛋白酶的酶学性质及基因表征等研究。本文的主要研究成果如下： (1)以环己烷、甲苯、丙酮、丁醇等溶剂为选择压力，从土壤样品中筛选获 得43株耐有机溶剂菌。经鉴定，以环己烷、甲苯为选择压力筛选的36株菌，多 为革兰氏阴性菌Pseudomonas属细菌；而由丙酮、丁醇混合溶剂筛选的7株菌均 溶剂(109P．2．03—5．6)的耐受特性，结果表明，革兰氏阴性菌对溶剂的耐受能 力普遍高于革兰氏阳性菌株，以辛醇、十二醇为代表的长链烷醇对革兰氏阳性菌 的细胞毒性尤为显著。43株耐有机溶剂菌的抗生素耐受性试验显示了明显的规 律性，即所有革兰氏阴性菌对氨苄青霉素、四环素、卡那霉素及氯霉素均不敏感， 而革兰氏阳性菌对上述4种抗生素均敏感，这一现象可能与细胞壁膜的通透性差 别或膜蛋白特性有关。 (2)从43株耐有机溶剂极端菌筛选耐有机溶剂蛋白酶产生菌，获得8株菌 株能相对高产胞外蛋白酶。其中2菌株所产胞外蛋白酶具有对高浓度亲水溶剂 YP 1和PseudomonasYYP6，其中Bacillus licheniformis aeruginosa licheniformis YPl为首次报道产溶剂稳定性蛋白酶的菌株，用于后续的研究。 (3)溶剂可显著影响YPl菌株产胞外蛋白酶的能力。烷烃溶剂的碳链长度对 YPl菌株产酶呈现了显著差异，正庚烷、正辛烷、正癸烷等溶剂显著抑制YPl 产蛋白酶，而十二烷、十四烷、十六烷能显著促进蛋白酶分泌产量提高1倍以上。 烷醇均能显著抑制YPl产胞外蛋白酶