构建多顺反子表达载体的有效工具——FMDV 2A.pdfVIP

生物工程学报 2007．Vol23．No5 凸衲e如“nd矿肋细^4lE’盯 的共表达”·。目前构建多顺反子载体的策略主要包 括：构建多启动子(multiplepmmtors)表达载体、构建 体在自身2A作用下发生与之类似的原初剪 剪切(sPlic堍)载体、表达融合基因(fusagene)、基因 之间以内部核糖体进入位点(intemal曲osomeentw 切““”1。虽然心病毒2A仅在c端高度保守，但是 其c端却与FMDv2A(18砚)高度相似““。由心病 sife，IREs)连接、基因之间以白剪切多肽2A(sem 2A 毒2A(180龃)到FMDv2A(18aa)可能反应了一种进 deavillg o。然而这些策略中除了 peptide)连接等“’5 自剪切多肽2A外，大多已逐步被放弃。究其原因主 化过程。心病毒和FMDv2A多肽序列中均含有一 要是基因起始效率低，上游基因与下游基因的表达严 个高度保守的基序即“．DxExNPGP．”，该保守元件在 vinl8 2A起始剪切中起到关键作用。 重不平衡。如病毒源IREsencephalo州ocarditjs (EcMv)mEs曾被用于构建多顺反子，但是由于存 在一些缺陷严重影响了其在多顺反子载体构建中的 同的是，这类2A在其N端剪切多聚蛋白前体，形成 应用”。91，主要有：(1)IRES介导的上下游基因表达 不平衡，通常下游基因的表达量仅是上游的20％到 P1蛋白和2A．P2蛋白。 50％；(2)IREs自身结构较大，其应用常受到载体容将这两类病毒比较发现，尽管心病毒2A蛋白 量的限制。 (150∞)分子量大小与肠道病毒和鼻病毒的2A接 andmouthvims 近旭序列上却没有任何同源性““”1。研究发现肠 口蹄疫病毒(food disease，FMDv) 2A是自剪切多肽的典型。由于FMDv2A具有剪切 道病毒和鼻病毒2A属于蛋白酶类，而FMDv和心病 效率高，上下游基因表达平衡性好，以及结构短小的 毒2A则是非蛋白酶类“…。 优点，使其成为构建多顺反子载体的理想工具之一。 除了FMDv2A外，在其它多种病毒中也发现有 本文主要介绍了FMDv2A的特性、“剪切”活力及其 相同功能的“类2A蛋白”(图3)。这些“类2A蛋 在构建多顺反子载体中的应用。 白”与FMDv2A有较大的同源性，并且大多能够在 体外实现高效剪切。 1 andmouthvirus 口蹄疫病毒(food 2 FMDv disea8e．FMDV)2A 2A的“剪切”机制 FMDv FMDv属小核糖核酸病毒，是一种正链RNA病 2A独特的“剪切”机制决定了2A只有在 毒，其基因组内含有一个长的开放读码框，编码一个 真核翻译系统中有活性，而在原核翻译系统中无活 225kD的多聚蛋白前体“““】(图1)。这个多聚蛋白 前体在翻译时即由2A在其c端进行“原初剪切”， 开”，动力学和结构模型分析表明，Gly和Pm之间的 得到外壳蛋白前体(PI．2A)和2Bc，P3。 肽键实际上并未形成””。在翻译过程中，2A的高