细胞生物学实验（吉林大学）细 胞 融 合.pptxVIP

细 胞 融 合 【实验目的】 了解并掌握细胞融合的方法 了解细胞融合技术及其在生命科学中所起的作用 掌握化学融合法，了解电融合法及CRY-3细胞融合仪的使用 【实验原理】 化学融合剂诱导融合：化学融合剂主要有高级脂肪酸衍生物、脂质体、钙离子、水溶性高分子化合物、水溶性蛋白质和多肽，其中最常用的是聚已二醇（PEG）。PEG用于细胞融合至少有两方面的作用：①可促使细胞凝结；②破坏互相接触处的细胞膜的磷脂双分子层，从而使相互接触的细胞膜之间发生融合，进而细胞质沟通，形成一个打的双核或多核融合细胞。 【实验材料及仪器】 实验材料：成年公鸡 实验器材：离心机，EP管，微量取样器，吸管，水浴锅，载玻片，盖玻片，显微镜 Alsever溶液、GKN溶液、0.85％生理盐水、50％PEG溶液，双蒸水 【实验步骤】 【实验步骤】 在公鸡翼下静脉抽取2ml鸡血，加入盛有8ml的Alsever液中，使血液与Alsever液的的比例达1∶4，混匀后可在冰箱中存放一周。 2.取此储存鸡血0.2ml加入0.8ml的0.85％生理盐水，充分混匀，1000r/min离心5min，弃去上清，加入1ml的0.85％生理盐水，重复上述条件离心两次。最后弃去上清，加GKN液1ml，离心。 3.弃去上清，加入1ml的GKN溶液，制成细胞悬液；（也可以用血球计数板计数，用GKN液将其调整为106个/ml）。 【实验步骤】 4.取以上细胞悬液0.1ml放入1ml的EP管中，然后再加入0.1ml的GKN液，放入37℃水浴中预热，同时将50％PEG液一并预热20min； 5. 20min后将0.2ml的50％PEG溶液逐滴沿离心管壁加入到0.2ml细胞悬液中，边加边摇匀，然后放入37℃水浴中保温20min。 6.20min后，加入GKN溶液1ml，静止于水浴中20min左右； 7.1000r/min离心5min，弃去上清，加GKN溶液再离心1次； 8.弃去上清，加入GKN液少许，混匀，取少量悬浮于载玻片上，加入詹纳斯绿染液，用牙签混匀，3min盖上盖玻片，观察细胞融合情况。 【实验结果】