AFLP分子标记及其应用.pptxVIP

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2018-01-14 发布于河南
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AFLP分子标记及其应用.pptx

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AFLP分子标记及其应用

;;先利用两种限制性内切酶水解基因组DNA产生不同大小的 DNA片段，再使用双链人工接头的酶切片段相连接，作为扩增反应的模板 DNA，然后以人工接头的互补链为引物进行预扩增，最后在接头互补链的基础上添加 1—3个选择性核苷酸作引物对模板 DNA 基因再进行选择性扩增，通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离检测获得的DNA扩增片段，根据扩增片段长度的不同检测出多态性。;;4种分子标记比较;;构建遗传图谱;12 个地方鸡种遗传多态性的AFLP指纹分析;实验材料血样来自国家家禽品种资源基因库和其它保种区或保种场保存的地方鸡种，共计12 个品种。每个鸡种取60 个血液样本，血样采用70%的酒精固定、保存。 ;流程基因组DNA 提取基因组DNA 的双酶切与接头连接 AFLP扩增反应凝胶电泳数据处理 ;基因组DNA 提取;基因组DNA 的双酶切与接头连接;AFLP扩增反应;选择性扩增：预扩???产物1∶ 20 稀释后，用于选择性扩增。选择性扩增引物5′和3′端各带有3 个选择性碱基，选取6 种引物组合进行选择性扩增。选择性扩增采用梯度PCR 方法反应条件为：第一循环扩增参数94 ℃ 30 s，65℃30 s，72 ℃ 80 s,以后每个循环温度递减0.7 ℃，扩增12 个循环，经13 个循环后退火温度降到55 ℃，再进行23个循环的扩增。 ;凝胶电泳;数据处理;展望;