C型副鸡禽杆菌血凝素基因的克隆表达及生物活性鉴定研究.pdf

禽类传染病 肾肿排盐散为中药利尿药．可促进尿盐排泄，缓解肾肿，以上药物配伍使用可产生互补。对 本病有较好的疗效。 4防制 4．1常规预防 加强饲养管理，注意通风换气，应在饲粮中添加一些维生素、矿物质以及一些机体必需 的微量元素，以增加机体的，同时应注意调整饲养密度，严格的执行消毒措施。及时的清除 舍内粪便，避免舍内粪便发酵产生大量的氨气，对鸡只的呼吸道黏膜产生较大的刺激。还应 注意尽量减少一些不必要的应激因素． 4’2痘苗预防 本病常用的疫苗有H120、H52、28／86肾型株弱毒苗及其一些油剂的灭火苗和联苗，由 于以上疫苗使用方法和效果有所不同。所以广大养殖户在使用时应根据鸡群的实际情况来加 以选择。 C型副鸡禽杆菌血凝素基因的克隆表达及生物活性鉴定 王宏俊1安焯13彝玉梅陈小玲‘张培君’ (1．北京市农林科学院畜牧暮匾研究所北京1000972．首都师范大学生命科学院，北京100037) 摘要血凝素是剐鸡禽秆茸(Avibac妇{umpa|a{}aIlj腑m11’，A陷)的主要抗原成分之一，鸡只对Apg的免 疫力与血凝素抗体滴度成正相关．根据GcIlBmk上已发表的c型ApgModesIo株的血凝素基因序列 为模板，利用PcR扩增出了l 026bp的血凝素基因，将其克隆到pET．32a栽体上，构建了pEl、HA原核表 达质粒井在BL2l大肠杆茸中过量表速．通过w融啪I．blonin窑厦血凝和血凝抑制试验鉴定谊重组蛋白的生 物学活性．蛄果显示成功地构建了Modesto株Apg血凝素基因的原棱表连载体，袁速并纯化了Apg重组血 凝素蛋白。谊蛋白可以和C型Apg抗血清特异性蛄告，并且可以凝集鸡红细胞．为进一步研究副鸡禽杆菌 血凝素的克疫功能奠定基础． 关键词剐鸡禽杆菌：血凝素；原核表达 即mg口f＆M懒，Hp曲是引起鸡传染性鼻炎(in的iouscoryza’Ic)的病原菌…。而鸡传染性 鼻炎是一种鸡的急性上呼吸道感染及毒素作用疾病，本病呈世界性分布郾J。本病可引起蛋 鸡产蛋量下降。育成鸡生长发育受阻和淘汰率增加，肉鸡肉质下降，造成很大的经济损失。 经典的分型方法将Apg分为A、B、c三个血清型啪。国内已分离到血清A型01和B型141的 Apg菌株。也曾有报道分离出血清c型的副鸡嗜血杆菌pJ。 凝抑制抗体水平常用来衡量Apg疫苗的保护效率17l。 本研究中．我们在比较Apg姒基因序列的基础上，首次对C型Modesto株Apg血凝素进 行了原核表达，并对其生物活性进行了探讨。 l材料和方法 1．1材料 1．1．1菌株与载体 作者简介：王宏俊(1972-)男(汉蕨)，内蒙古凉城县人，博士，副研究员，主要从事分子免疫学与预防 兽医学研究，E-眦il：wllj_1209@163．∞m 基金项目：863项目(2005AA24605lk北京市科技新星项目(2005835)资助 中国畜牧兽医学会动物传染病学分会第十二次学术研讨会 vector Easy 菌株感受态细胞、DH5a菌株感受态细胞均购自北京天根公司。克隆载体pGEM-T 购自Promega公司。表达载体PET-32a(+)是Novagen公司产品，由本研究室保存。 1．1．2主要试剂及试剂金 DNA快速纯化回收试剂盒、DNA凝胶回收试剂盒、质粒提取试剂盒均购自北京天根公 司；IPl℃和x-Gal等试剂购自新经科公司。硝酸纤维素膜是Phamacia公司产品。酶标二 抗兔抗鸡IgG，HRP、N一十二烷基肌氨酸钠均为sigma公司产品。 1．2方法 1．2．1引物的设计与合成 计一对引物，并在上、下游引物5，端分别加上＆姝I和般口I酶切位点(下划线部分)． AAA AAAAcTGcAA：I℃GCA3’； cTc 上游：5’鱼△△3墼ATG 下游：5’￡!￡鱼△鱼rI．A GTTACCrrTAAC ToA3’由北京奥科生物工程公司合成。溶解于适量灭菌