DMSO对梨属植物ITS区扩增及测序的影响研究.pdf

果树141 DMSO对梨属植物ITS区扩增及测序的影响 郑小艳蔡丹英滕元文’ (浙江大学农业与生物技末学院园艺系，杭州 310029) transcribed spacer)区的扩增和测序性能。结果表明适量的DMSO作为一种辅助剂不仅显著 提高了扩增效率和特异性，而且有效的防止了不同长度的ITS假基因序列的扩增，使得PCR 产物直接测序得到理想的效果，为基于ITS序列进行梨属植物系统分析奠定了基础。 关键词：DMSO；ITS；梨属植物；假基因序列 PCR and Abstract：The ofribosomalITS(internaltranscribed amplificationsequencing of L．was theadditionof4％DMSOinbasicPCR spacer)regionPyrus improved by proto- c01．ItwasfoundthatDMSOusedasan increasedthe adjuvant greatly amplificationefficiency of differentof and PCR，and kindsITS were from specificity pseudogenesequencesprevented aresult，idealdirect ofPCR were obtained。whichwill beingamplified．As sequencesproducts thebasisfor a of provide reconstructingphylogeneticrelationshipPyrus． Key words：DMSO；ITS；Pyrus；pseudogenesequence 梨属植物(Pyrus)属于蔷薇科梨亚科，在中国各地均有分布。目前除了少量品种外均属自交不亲 和，因此现存的许多的种及品种为杂种起源，使得基于形态学的梨属植物系统关系仍没有得到很好的建 立。随着PCR直接测序技术的出现，不同DNA片段或基因序列分析已经广泛应用于植物系统研究， transcribed 其中ITS序列(internalspacer)巳成为研究被子植物属内种间和较近的属间关系中应用最 为广泛的序列之一。ITS区位于核核糖体(nrDNA)内，以成千上万的拷贝存在于一条或多条染色体 上，早期的一些研究发现其拷贝间已经完全协同进化，然而越来越多的研究已经发现甚至很多植物的非 杂种的二倍体和同源多倍体个体内存在nrDNA多态性，其中不乏存在有分歧的基源同类序列(paral— ogues)“]，同时还存在一些脱离了功能限制(functional 序列的深入研究，建立了确定植物中ITS假基因存在的方法后，ITS假基因在被子植物被广泛的检测 到。因此在系统研究中，不进行假基因判断和区分将导致序列取样的不准确口]，而且由于假基因序列较 branch 高的替代速率会导致系统树的长枝吸引(10ng attraction)，最终错误的评估了所研究对象的系统 分体现【5][印。因此在利用ITS