CBF3和Cor15A基因导入黄瓜研究.pdfVIP

474 园艺学进展(第六辑) CBF3和Corl5A基因导入黄瓜 张兴国 邓小燕 邵长文 孙涌栋 梅 茜 苏承刚 (西南农业大学园艺园林学院，重庆400716) 摘要本文从拟南芥中克隆了冷(早)诱导基因RD29A启动子、冷(旱)应答转录活化因子 基因CBF3和抗寒基因CorlSA。基因瞬问表达研究结果显示，克隆的Pd329A启动子片段在黄瓜中 t Corl5A 具有低温诱导活性。通过农杆菌介导，将35S，CBF3基因和RD29A·CBF3与RD29A 双基因导入到黄瓜基因组。 关键词黄瓜；CBF3转录因子基因}Corl5A抗寒基因}转基因 黄瓜是一种重要的喜温型蔬菜。由于所在种属内没有耐寒的种质资源，通过杂交转育提高 现有品种的抗寒性是不可能的，因此，借助基因工程手段导入外源基因就成为获得抗寒黄瓜品 种的重要途径。 在植物抗寒转基因研究中，Davies等(1987)首先将美洲拟鲽的鱼抗冻蛋白基因导入烟 草、郁金香和油菜，发现转基因植株获得了一定的抗冻力。随后，利用脱饱和酶基因[1]、拟南芥 的甘油一3一磷酸酰酶基因[”和Corl5A基因脚等冷诱导基因也在不同程度上提高了受试植物的 抗寒力。但是这些单基因的导入在植物抗寒力提高上并非十分有效刚。 芥、油菜、苜蓿、菠菜、马铃薯、大麦、小麦和黑麦等喜凉或越冬植物中获得近百个冷诱导基 因[“。其中的许多基因不受ABA诱导，具有直接和快速的冷应答特点01。尽管这种低温诱导信 号传递过程目前还不清楚，但信号传导末端的应答低温信号的顺式作用元件和反式作用因子 已得到较深入研究[5]。“CCGAC”序列是鉴别到的冷／旱应答元件(CRT／DRE)，存在于拟南芥 相应的结合蛋白因子CBFl、CBF2和CBF3(CRT／DRE bindingfactor)基因也在拟南芥中得 到克隆‘…。 过量表达CBFl或CBF3转录因子基因不仅能够活化所有带有CRT／DRE元件的冷诱 导基因表达，提高未锻炼(或已锻炼)拟南芥的抗寒性嘲，而且还能够引发与冷适应相关的、诸 如脯氨酸和可溶性糖含量增加的一系列生化变化，即可以在常温下启动冷适应中的多种理化 反应[8]。这种CRT／DRE元件及其结合因子CBF构成的低温应答调控组件在植物界基因组中 的存在被认为具有普遍性[9]，因此为植物抗寒性遗传改良展示了新的途径。即可以采用导入一 个冷应答转录因子基因，从转录水平上促进大量冷诱导基因表达，实现提高受试植物抗寒力的 目的Ⅲ。 本研究希望利用拟南芥CBF3转录因子基因的超表达来提高黄瓜自身的冷诱导基因的表 达水平，充分发挥其自身抗寒基因的作用，同时导入Corl5A高效抗寒基因，以期尝试提高黄 瓜的抗寒力。 基盒项目：重庆市2002年应用基础资助项目“耐寒转基因黄瓜新种质的创制”。 蔬 菜 475 1材料与方法 1．1试材 sativus 选用津研4号黄瓜(CucumisL．)为材料，剥离种皮、表面消毒和接种到培养基上萌 发后待用[10]。 1．2 DNA片段克隆 Erecta生态型基因组DNA中扩增低温 对，采用Pfu高保真DNA聚合酶从拟南芥Landsherg GenBank 诱导启动子RD29A(NCBI TACrrrGTG． (AF076155)。以TCTAGATGGCGATGTCTTTCTCAGG和GAGCTCCC 华州立大学Chengbing 10 DNA聚合酶72Cmin加尾后，克隆到pUCm—T载体上。委托上海博亚公司测序。 P—RD29Ac 70 PRD294(D13044)