内皮素3对不同毛色绵羊黑色素细胞的影响.pdfVIP

中国农业科学 2017,50(6):1139-1146 Scientia Agricultura Sinica doi: 10.3864/j.issn.0578-1752.2017.06.014 内皮素3对不同毛色绵羊黑色素细胞的影响 李亚楠，赵兵令，王海东，陈天直，刘颖，常露程，董常生 （山西农业大学，山西太谷 030801 ） 摘要：【目的】探索内皮素3（EDN3）对来源于不同毛色体外培养的黑色素细胞产生黑色素作用机制及差异的 影响。【方法】体外培养不同毛色皮肤来源的黑色素细胞，通过 MTT 法检测不同细胞在 EDN3 影响下的增殖率，分 别提取两种细胞的总 RNA 和总蛋白，总 RNA 经反转录合成 cDNA，采用实时荧光定量 PCR 方法检测 EDN3 对两种 细胞内 EDNRB、NRas 及 TYR 在 mRNA 水平相对表达量的影响，总蛋白通过 Western blot 方法检测 EDN3 对两种细 胞内 EDNRB、NRas 及 TYR 在蛋白水平的表达量是否发生变化，结果均使用 SPSS19.0 软件进行差异显著性分析。 【结果】MTT 法测得 EDN3 对黑白两种来源的黑色素细胞的增殖均产生促进作用，实时荧光定量 PCR 结果显示添 加 EDN3 的白色来源细胞内 EDNRB mRNA 的相对表达量是正常细胞组的 1.7992 倍，NRas 是正常细胞组的 1.8536 倍差异极显著(P0.01)，但 TYR mRNA 的相对表达量未发生明显变化；添加 EDN3 的黑色来源细胞内 EDNRB mRNA 的相对表达量是正常细胞组的 2.2512 倍，NRas 是正常细胞组的 1.3859 倍，TYR 是正常细胞组的 15.5710 倍差 异极显著(P0.01)；Western blot 结果显示添加 EDN3 的白色来源细胞内 EDNRB 蛋白表达量是正常细胞组的 3.0827 倍差异极显著(P0.01)，NRas 是正常细胞组的 1.2936 倍差异显著(P0.05)，TYR 蛋白表达量未发生明 显变化；添加 EDN3 的黑色来源细胞内 EDNRB 蛋白表达量是正常细胞组的 3.9800 倍差异极显著(P0.01)，NRas 是正常细胞组的 1.3658 倍差异显著(P0.05)，TYR 是正常细胞组的 1.8498 倍差异显著(P0.05)。【结论】EDN3 促进白色来源的黑色素细胞增殖但对色素合成的限速酶 TYR 未产生促进作用；EDN3 促进黑色来源的黑色素细胞 增殖并可能促进黑色素生成。 关键词：内皮素3（EDN3）；绵羊；毛色；黑色素细胞 Effect of EDN3 on of Sheep Skin Melanocytes with Different Coat Colors in Vitro LI YaNan, ZHAO BingLing, WANG HaiDong, CHEN TianZhi, LIU Ying, CHANG LuCheng, DONG ChangSheng (College of Animal Science and Veterinary Medicine, Taigu 030801, Shanxi) Abstract: 【Objective 】 The objective of this study is to explore the effects of EDN3 in vitro on sheep melanocytes with different coat colors and to find the mechanisms of production of melanin and their differences. 【Method 】 Melanocytes from