两种重组抗cd20人源化单克隆抗体定量分析方法的比较及其在药代.pdfVIP

第42 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE)摇 研究报告 第3 期 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 摇 2014 年3 月 Chinese Journal of Analytical Chemistry 337 ~342 DOI:10.3724/ SP.J.1096.2014.30623 两种重组抗 CD20 人源化单克隆抗体定量分析方法的比较 及其在药代动力学研究中的应用 1,2 2 2 2 *2 邓承莲 摇 邹 佳 摇 欧伦 摇 董立厚摇 宋海峰 1(广西医科大学,南宁530002) 2(军事医学科学院放射与辐射医学研究所,军事医学科学院药代动力学重点实验室,北京 100850) 摘摇 要摇 采用酶联免疫吸附分析(ELISA)与基于Wil2鄄S细胞的流式细胞术(FCA)两种方法对生物基质中的 重组抗CD20人源化单克隆抗体(rh鄄anti鄄CD20zumab)进行定量分析,并对两种方法进行系统比较。 方法学验 证结果表明,两种方法均具有良好的特异性、精密度和准确度,但定量范围存在明显差异。 ELISA法批内和批 间精密度均小于 19.5%,准确度为-18.2% ~17.6%;FCA 法批内和批间精密度均小于 19.0%,准确度为 -18.9% ~18.4%。二者定量范围分别为0.04 ~5.0 mg/ L 和3.1~200 mg/ L,ELISA 法的灵敏度显著高于 FCA法。 利用两种方法测定猕猴静脉滴注rh鄄anti鄄CD20zumab 后的血药浓度鄄时间变化并进行药代动力学 (PK)分析。 结果表明,在给定剂量下,通过两种方法获得的PK结果具有良好的一致性。 FCA法是一种细胞 表面抗原靶向性抗体类药物PK研究及药效动力学(PD)研究的快捷、理想的方法。 关键词摇 抗CD20单克隆抗体;人源化;ELISA;流式细胞术;药代动力学 1摇 引摇 言 近年来,随着抗体药物应用的迅猛发展,该类药物的药代动力学(Pharmacokinetics,PK)与毒代动力 学(Toxicokinetics,TK)研究成为一大热点。 目前,在抗体的PK研究中,定量分析方法主要依赖基于免 疫微孔板的配体结合分析(Ligandbinding assays,LBA)方法,如酶联免疫吸附分析(Enzyme鄄linkedimmu鄄 [1,2] nosorbent assay,ELISA)、放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)等 。 此外,基于免疫相关技术的表 [3] [4,5] 面等离子谐振(Surface plasmon resonance,SPR) ,Gyros ,电化学发光(Electrochemiluminescence, [1,6] ECL) 等定量分析方法也在快速发展。 在免疫分析方法中,通常需要精制的抗原以及特异性的单克 隆抗体用于生物基质中被分析物的捕获与检测。 但面对各种层出不穷的新型抗体药物,商品化的特异 性单抗极少。 因此,制备靶抗原、特异性抗体或抗独特型(Idiotype,ID)抗体,往往成为生物分析方法建 立乃至整个PK/ TK研究的瓶颈。 在此情况下,不依赖于精制抗原或特异性抗体的分析方法如流式细胞 [7] [8] 术(Flow cytometry assay,FCA) 、液相色谱鄄质谱联用 等方法有望大大加快抗体药物的研发进程。 但 这些方法的适用性及通用性尚有待于进一步考证。