细菌性食物中毒检测临床意义.docVIP

精品论文 参考文献 细菌性食物中毒检测临床意义 金 晶 殷爱芹 徐子茗 (哈尔滨市南岗区疾病预防控制中心 黑龙江哈尔滨 150004) 【中图分类号】R595.7 【文献标识码】A 【文章编号】1672-5085 (2010)08-0108-01 临床上引起食物中毒的细菌很多，如沙门氏菌，空肠弯曲菌，葡萄球菌，副溶血性弧菌，蜡样芽胞杆菌，致病性大肠杆菌，变形杆菌，肉毒梭菌，小肠结肠炎耶尔森菌等，粪便培养对临床确诊有重要意义，但有时粪便培养不一定有致病菌存在， 阳性见于沙门菌引起的食物中毒，沙门菌是引起食物中毒的主要病原菌之一，亦是最常见的食物中毒的原因，一般从病人的粪便或呕吐物中分离出沙门菌， 金黄色葡萄球菌引起的食物中毒：主要通过对食物或粪便中的肠毒素检测来进行诊断，因为被污染的食物经加热后葡萄球菌已被杀死，若培养则出现阴性结果，而肠毒素在加热的情况下并不被破坏，因此，肠毒素的检测可用动物试验或酶联免疫试验协助， 副溶血性弧菌引起的食物中毒：主要是摄入被副溶血性弧菌污染的水产品和腌菜所致，该菌引起的食物中毒主要靠细菌学检测确诊，但在粪便培养时，大多数病例第二天即转为阴性，仅有少数在2～4天内能检出阳性，因此，对可疑病例应及时采集粪便培养，以免影响阳性检出率， 空肠弯曲菌引起的食物中毒是由于食入弯曲菌污染的肉类或牛奶所致，该病的确诊主要依据细菌学检测， 小肠结肠炎耶尔森菌引起的食物中毒：采集食物或粪便的标本进行细菌培养， 肉毒梭菌引起的食物中毒：主要是由肉毒梭菌产生的外毒素所引起，通常应在现场采集可疑食物做细菌学检测或动物试验，婴儿的肉毒梭菌中毒，则主要是通过粪便内毒素的检测来确诊，粪便培养结果多为阴性。 1　方法 1.1　实验设备、检测试剂及培养基　荧光PCR仪(美国MJ opticon2)、金黄色葡萄球菌DNA检测试剂盒(达安基因提供)、金黄色葡萄球菌肠毒素RPLA(反相被动胶乳凝集实验)试剂盒(OXOIDTD0900)、7.5%氯化钠肉汤、胰蛋白胨大豆肉汤、BairdPark琼脂、血琼脂、冻干兔血浆、微量甘露醇发酵管。所有试剂及培养基均在效期内使用，实验室室内质控和室间质评均符合要求。 1.2　菌株分离　按国标方法称取25g检样加入225ml灭菌生理盐水中，均质器混匀后吸取5ml接种于50ml 7.5%氯化钠肉汤36℃plusmn;1℃增菌24h，转种BairdPark(BP)琼脂36℃plusmn;1℃培养24h后，挑取可疑菌落染色镜检、转种血琼脂平皿及做血浆凝固酶实验、甘露醇发酵实验。金黄色葡萄球菌在BP琼脂上形成圆形、光滑、突起、湿润的灰黑色菌落，菌落周围有一浑浊带，外层有一透明圈。 1.3　金黄色葡萄球菌DNA定性检测　依试剂盒说明，0＜Ctle;35判阳性，Ct=0为阴性。 1.4　肠毒素检测　将分离得到的菌落接种至胰蛋白胨大豆肉汤36℃plusmn;1℃培养18h～24h，患者呕吐物标本、可疑中毒食品可直接取样10g加入10ml生理盐水，均质器混匀，900g、4℃离心20min，取上清用0.25mu;m～0.45mu;m微孔滤膜过滤，保留滤液作反相被动胶乳凝集实验(RPLA)，检测A、B、C、D四型肠毒素。 2 讨论 2.1　建立快速、准确诊断食物中毒病原菌的检测方法是有效控制食物中毒的重要手段　目前，国内金黄色葡萄球菌食物中毒病原诊断的金标准仍然是细菌的成功分离，通过增菌、分离培养、生化鉴定等一系列步骤来完成，灵敏度低，操作较烦琐，耗费时间长。应用荧光PCR技术则弥补了这个缺点，灵敏、快速、特异、操作简单，尤其适用于无活菌或含菌量低的用药后患者标本及已加热杀菌的可疑中毒食品的检测。本次实验结果显示，FQPCR检测金黄色葡萄球菌的阳性率与分离培养法的阳性率有较好的伴随关系，检测时间由传统方法的4d缩短到4h，证明荧光PCR检测结果可信、快速，但正因为其高度的敏感性，而外环境中金黄色葡萄球菌的普遍存在，使检测过程中易受外环境的污染而造成假阳性，所以只有结合两种方法的优点，把常规培养法与FQPCR法相结合，把荧光PCR技术作为初筛、辅助诊断手段，为早期诊断及最后确诊病原指明方向，避免在检测中犯方向性错误而浪费更多的时间延误诊断。 2.2　金黄色葡萄球菌中毒的实质是耐热肠毒素中毒，只有检测出肠毒素，才能为金黄色葡萄球菌中毒下最后的定义，实验结果显示：RPLA直接检测标本中金黄色葡萄球菌肠毒素不够灵敏，最好将分离到的阳性菌株接种到产毒培养基(胰蛋白胨大豆肉汤等)36℃plusmn;1℃培养18h～24h再行检测。 2.3　另外，本实