纳米粒对鼠增殖性糖尿病视网膜病变玻璃体内血管内皮生长因子表达影响的实验研究.docVIP

精品论文 参考文献 纳米粒对鼠增殖性糖尿病视网膜病变玻璃体内血管内皮生长因子表达影响的实验研究 曹永梅1 李山丹2（1内蒙古国际蒙医医院 内蒙古呼和浩特 010065；2通辽市医院 内蒙古通辽 028000） 【中图分类号】R965 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）06-0107-02 【摘要】 目的 探讨纳米粒疗法对鼠增殖期糖尿病病变玻璃体内血管内皮生长因子VEGF表达影响并探讨机制。方法 应用对抗体央心酶联免疫吸附实验ELISA法，对经过纳米粒法治疗增殖期糖尿病视网膜病变，检测玻璃体标本VEGF含量并与空白对照组比较采用t检验比较方差分析治疗前后差异，Plt;0.05差异有统计学意义。结果 治疗组玻璃体VEGF含量平均152.3011plusmn;17.8671ng/l，对照组玻璃体VEGF含量平均609.7452plusmn;87.4238ng/l。结论 纳米粒疗法对鼠增殖期糖尿病视网膜病变玻璃体VEGF有显著抑制作用，通过下调HIF-lalpha;表达，降低VEGF的分泌，抑制新生血管生长。 【关键词】 血管内皮生长因子 糖尿病视网膜病变 玻璃体 1 材料方法 1.1材料 Sprague-Dauley 大鼠20支，体重100g左右，制成糖尿病鼠模型。每只大鼠腹腔注射60mg/kg链脲菌素，2-3天后出现糖尿病症状，1月后出现增殖型糖尿病视网膜病变表现。大鼠分成两组，10支处死取玻璃体标本作为对照组，另外10支玻璃体腔注射纳米粒液4ul，2周后处死取玻璃体标本作为实验组。 1.2 VEGF检测 采用鼠VEGF免疫试剂盒，SPECTRA酶标仪。按100ul/孔加入不同浓度标准样品及样本，用封板胶纸封住反应孔，37℃孵箱孵育90分钟，洗板5次，加入100ul/孔生物素化抗体工作液，同样操作孵育60分钟，洗板5次。加入底物显色剂100ul/孔，37℃避光孵育20分钟。加入终止液100ul/孔，混匀，用酶标仪测出样品吸光度值，从而测出VEGF含量。 1.3半定量RT-PCR法检测玻璃体血管HIF-lalpha;MPNA与VEGF MRNA。采用大鼠HIF-lalpha;、VEGF、GAPDH的DNA序列，应用primer 5.0软件设计引物，pcr扩增。将pcr产物2ul置2%琼脂凝胶电泳，对电泳带用凝胶成像仪进行拍摄，软件分析，测出积分吸光度（A）值，测出HIF-lalpha;mar，VEGFmrna的相对表达量。 1.4统计学分析方法 利用spss 12.0软件系统对实验结果（-xplusmn;S）进行分析，方差分析q检验，Plt;0.05作为差异有统计学意义。 2 结果 治疗组玻璃体VEGF含量平均152.3011plusmn;17.8671ng/L，对照组玻璃体VEGF含量平均609.7452plusmn;87.4238ng/L；治疗组玻璃体新生血管组织HIF-lalpha; 0.08plusmn;0.012，对照组玻璃体新生血管组织HIF-lalpha; 0.225plusmn;0.017。Plt;0.05有统计学差异。 3 讨论 VEGF作为一种较强的促新生血管生成因子,在正常眼组织中有较低水平的分泌,参与生理过程血管形成[1]，维持血管内皮活性VEGF是在糖尿病视网膜病变缺血时,产生了一种可溶性的血管生长因子,特异性地作用于血管内皮细胞VEGF受体,促进血管内皮细胞有丝分裂,增殖期VEGF含量明显增加[2，3]。 纳米粒疗法能降低VEGF分泌含量,其具体作用抑制为下调新生血管形成过程中一种重要的转录因子HIF-lalpha;的表达,从而达到抑制新生血管的作用[4，5，6]。 采用RT-PCR及免疫组织化学方法,发现纳米粒疗法能抑制HIF-lalpha; MRNA与HIF-lalpha;的表达,降低VEGF MRNA与VEGF的表达,并且这两种表达高度相关,提示可能通过抑制HIF-lalpha;的表达及活性,降低VEGF MRNA与VEGF的表达,进而抑制新生血管的形成。 纳米作为一???新型的眼用药物载体,没有免疫原性,生物相容性好,治疗长效。探讨纳米粒疗法的作用机制和作用途径为临床治疗糖尿病视网膜新生血管增殖提供重要的参考和依据,但纳米工艺还有待于进一步完善。 参 考 文 献 [1]Smiddy WE , FlynmHW . Viectomy in the management of diabetic retinpathy .SurvOpatha