结核分枝杆菌的检验及鉴别.doc

精品论文 参考文献 结核分枝杆菌的检验及鉴别 黑龙江省大兴安岭地区新林区人民医院 165023 【摘 要】分枝杆菌属是一类细长略弯曲的细菌，有分枝生长趋势，可呈丝状或菌丝样生长。无鞭毛，无芽孢。本属细菌的主要特点是细胞壁脂质含量高，其主要成分是分枝菌酸。本菌需氧，营养要求特殊，大多数生长缓慢，个别菌种目前尚不能人工培养。结核分枝杆菌复合群是人类结核病的主要病原体，包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、非洲分枝杆菌和田鼠分枝杆菌。 【关键词】分枝杆菌；检验 1生物学特性 1.1形态染色 结核分枝杆菌为细长略带弯曲的杆菌，有分枝生长趋势，单个、成堆或呈束状排列，大小（0．3～0．6）mu;mtimes;（1～4）mu;m，形态如球状、串珠状或丝状，革兰染色不易着色，抗酸染色阳性，一般分枝杆莴采用齐-尼（Ziehl-Neelsen，E-N）抗酸染色后，结核分枝杆菌呈红色，非抗酸菌染色呈蓝色。 1.2培养特性 本菌为专性需氧菌。最适生长温度为37℃，低于30℃不能生长。pH 6．5～6．8。营养要求较高，但生长缓慢。必须在含血清、卵黄、马铃薯、甘油以及某些无机盐类的特殊培养基上才能良好生长。本菌在培养基上缓慢生长，一般2～4周才能生长出菌落。菌落表面干燥、粗糙、隆起、呈颗粒状、结节状或菜花状、乳A色或淡黄色，不透明。结核分枝杆菌在5％～l0％的C02条件下对其生长有促进作用。其对营养要求高，对一些营养成分有特殊的要求。例如，结核分枝杆菌专嗜甘油为碳源，而牛分枝杆菌则以丙硐酸盐为碳源。天冬酰胺是结核分枝杆菌生长最好的氮源，钾、镁、铁、磷等无机离子对其生长有促进作用。 1.3生化反应 结核分枝杆菌的生化反应不活泼。不发酵糖类。多数菌株触酶试验阳性，但68℃加热后酶活性消失即热触酶阴性，借此可与非结核分枝杆菌区别，后者热触酶试验大多阳性。结核分枝杆菌硝酸盐还原试验、烟酸试验和烟酰胺酶试验阳性，而牛分枝杆菌则为阴性，可有助于两菌的鉴别。 2细菌学检验 结核病的症状和体征往往都不典型，虽可借助x线摄片诊断，但确诊仍依赖于细菌学检验。 2.1标本采集 结核病的标本采集视病变部位而定。一般肺结核可以采集痰、支气管洗涤或喉拭子；结核性胸膜炎采集胸腔积液、腹水等；肠结核可采集粪便；肾结核者采集尿液；皮肤结核采集脓液或伤口分泌物。各种结核都可以采集病灶组织标本。①痰标本的采集：留取清晨咳痰3～5 ml。如咳痰少可以收集头一天晚至清晨咳出的全部痰；也可以通过3％～l0％的盐水雾化吸入或口服氯化铵促进排痰。②胸腔积液、腹水标本的采集：要求无菌操作，标本应立即送检。若不能立即送检，为防止标本凝固，可加1％柠檬酸钠至终浓度为5％。③尿液标本：肾结核患者可以随尿排出分枝杆菌，但为间歇性排出，故应收集24小时混合尿作为标本。 2.2标本前处理 利用分枝杆菌能耐酸碱的特性，用酸碱处理标本使标本中的杂菌被抑制甚至杀死，同时还可以溶解标本中的黏液、脓汁、蛋白等，使其中包裹的分枝杆菌释放出来，提高检出率。 2.3检验方法 涂片检查抗酸杆菌是结核病发现、诊断和疗效评价的重要指标之一。在标本采集、涂片制备、染色以及镜检各步骤均应标准化并进行有效的质量控制。 2.3.1涂片 ①直接涂片：直接挑取标本（或处理标本）涂抹载玻片而得名。根据涂抹的厚度可以分为薄片和厚片。取O.Ol ml标本涂抹10 mmtimes;10 mm范围为薄片，取0．1 ml涂抹20 mmtimes;15 mm为厚片。②集菌涂片：指将标本浓集以后再涂片。集菌方法有沉淀法和漂浮法。沉淀集菌法为将标本用2％NaOH消化，于37℃放置30分钟；或将标本高压灭菌液化后，3 000转／分钟离心30分钟取沉淀涂片。 2.3.2染色 本菌的染色常采用抗酸染色和金胺0染色。①抗酸染色：将标本原涂片经干燥、火焰固定后加初染液，加热至出现蒸气3～5分钟，不能沸腾，不能蒸干，冷却水洗。②金胺0染色：标本经涂片干燥、火焰固定后，滴加初染液，10～15分钟后水洗。加脱色液l～2分钟直至无黄色，水洗。加复染液l～2分钟，水洗，自然干燥后荧光显微镜检。结果为背景黑色，抗酸菌显金黄色或橙黄色荧光。 3分离培养 本菌营养要求高、生长缓慢。培养基中需要含有丰富的营养，国内外广泛使用的固体培养基有罗氏培养基、J]qll培养基、常用的液体培养基有Middlebrook7H，和Sauton培养基，而L-型细菌的检