建议对疫苗进行细菌内毒素含量检测研究.pdfVIP

ofthe10th of Branch,ChineseAssociationofAnimaland Science ProceedingsSymposiumBiological Veterinary 2．3冻干 行10倍稀释，放4℃冰箱静置6—12小时。 2．3．2配制取上清夜与保护剂以1：1比例混合均匀后，分装安剖瓶，1毫升／支。保护剂分为两组，一组为 5％蔗糖牛奶保护剂，一组为水解乳蛋白保护剂。 合适的冻干曲线进行冻干。 2．4检验 2．4．1物理性状及无菌检验按《兽用生物制品规程》要求进行检验。 4齿龄健康山羊)，每滴度接种2只山羊，每只山羊0．2毫升，观察10天。 3 结果 以水解乳蛋白为保护剂的一组样品冻干后干损严重，废弃。以5％蔗糖牛奶为保护剂的样品冻干后外观呈 意的结果。 4讨论 4．1样品预冻时间与样品的装量、容器品种有关，原则是使样品冻实即可。在使用本实验室冻干柜进行冻 干时，如果直接把样品放入冻干机中进行预冻，冻干结束后，冻干品外观较易出现结晶现象，而在一30℃至一 40℃冰柜中进行预冻，则较好地避免了这一现象。 4．2羊痘发痘部位皮肤中也含有大量的病毒，但在本次试验中采毒时只收集了皮肤下的发痘组织，没有要 皮肤，这是出于减少污染的考虑。 4．3在本次试验中，冻干品毒价不是很高，这应该与样品含毒量较低有关(每支冻于毒中组织毒的实际含量 为0．05克)。增大含毒量应该会提高病毒滴度，应该会更有利于病毒的长期保存。 建议对疫苗进行细菌内毒素含量检测 杨镇燕 (中牧股份兰州生物药厂， 甘肃兰州730046) [摘要]细菌内毒素是革兰氏阴性菌细胞壁外膜的脂多糖(鹏)，其生物学活性多样，也是革兰氏阴性菌感染病死率高 的原因之一。随着GMP的实施，对产品的要求也越来越高，因为疫苗内内毒素含量过高，直接影响动物及人类健康，所以笔者 想通过本文介绍，建议对疫苗进行细菌内毒素含量的检测。 [关键词]细菌内毒素；脂多糖；革兰氏阴性菌 早在20世纪初，RichardPfeiffer研究霍乱弧菌时，发现革兰氏阴性菌中有一种相对不容性的成分，能够 引起发热、休克、器官损害等病理反应，因其毒性效应和性质与外毒素(exotoxin)存在显著差异，就用内毒素 (endotoxin)这一术语来描述该物质。随后多年对革兰氏阴性菌外膜的超微结构技术和生物分析技术的研究 证明内毒素是磷脂双分子层结构，细胞膜的外部主要有结构易变的两性分子所组成，即脂多糖。LPS是内毒 素的主要成分。革兰氏阴性菌的细胞壁有内向外分别为内膜、硬膜(周质和肽聚糖层)和外膜。内膜(质膜) 一208— 中国畜牧兽医学会生物制品学分会第十次学术研讨会论文集 层，用溶菌酶和EDTA处理后消失；外膜也是双层的“单位膜”结构，由蛋白质磷脂构成，细菌内毒素(即LPs) 就存在与这一结构中。LPS在菌体表面形成一个疏水的障碍层，限制有害物质(如胆盐、消化酶以及某些抗 生素等)的侵入，使细菌能够避免很多宿主固有的防卫因子(包括补体、溶酶菌、阳离子白质等)的作用。内毒 素是一类具有高度活性的分子，对机体具有广泛的生物学作用，故而在革兰氏阴性菌感染的发病机制中起着 十分重要的作用。 内毒素的生物学活性：LPS及其脂类A对机体能发挥广泛的生物学作用(见下表)。LPS一方面可视为 革兰氏阴性菌的致病因子，因而在革兰氏阴性菌感染的发病机理中起着十分重要的作用，另一方面LPS对机 体亦可表现出显著的有益作用，如抗肿瘤作用，增强机体特异性抵抗力等。所有的内毒素尽管来源不同，但 均具有相似的生理作用。 表 热原性 鲎溶解物胶化作用 致死性 诱导对感染的非特异抗性 白细胞减少 诱发对内毒素的耐受性 白细胞增多 佐剂活性 Shwartxman反应 丝裂原活性 骨髓坏死