毕赤酵母表达重组牛胰脏羧肽酶a的响应面法优化.pdfVIP

生物技术通报 ·研究报告· BIOTECHNOLOGY BULLETIN ( ) 2016, 32 3 :190-197 毕赤酵母表达重组牛胰脏羧肽酶 A 的响应面法优化 王晓云  徐诗涵  梁志宏  黄昆仑 （中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083） 摘 要 ： 采用Central Composite Design（CCD） 实验设计及响应面分析相结合的方法，对毕赤酵母表达牛胰脏羧肽酶A 的表 达条件进行优化，旨在获得牛胰脏羧肽酶A 的最佳表达条件。单因素实验结果显示，诱导时间为96 h 时，最佳甲醇含量为0.5%、 最佳pH 值为4、诱导时最佳菌体OD600 值为7。在此基础上，利用CCD 实验设计及响应面分析法进行回归分析，获得最优表达参 数为 ：甲醇含量0.5%、诱导pH 为5.90、接种前种子培养基OD600 为6.54。在优化后的条件下进行验证实验，得到牛胰脏羧肽酶A 的表达量为0.325 mg/mL，与理论值 （0.326 mg/mL）相比，相对误差较小，为0.38%。 同时，对表达产物进行了Western Blot 鉴定。 研究表明，采用响应面法分析优化牛胰脏羧肽酶A 的表达条件准确可靠，有助于找出最佳条件，为指导其在发酵罐中进行高密度 发酵生产牛胰脏羧肽酶A 奠定基础。 关键词 ： 牛胰脏羧肽酶A ；毕赤酵母 ；响应面 DOI ：10.13560/ki.biotech.bull.1985.2016.03.030 Optimization of Expression Conditions of Recombinant Bovine Pancreatic Carboxypeptidase A in Pichia pastoris by Response Surface Method - - - - WANG Xiao yun XU Shi han LIANG Zhi hong HUANG Kun lun （College of Food Science Nutritional Engineering ，China Agricultural University ，Beijing 100083 ） Abstract: Central composite design（CCD）and response surface methodology（RSM）were used to optimize the expression conditions of bovine pancreatic carboxypeptidase A. The results of single-factor test showed that the optimal conditions as following ：the inducible expression time was 96 hours，the methanol content was 0.5% every 24 h，the initial induction pH4，and OD600 before induction expression was 7. Based on the above result，CCD was used to design the tests，and RSM to have regression analysis. The optimal parameters for the expression were obt