生物分离反胶束萃取.ppt

反胶束萃取的操作 A 萃取的基本方法 B 反萃取 . 六、双水相萃取的研究进展 ◎双水相萃取同亲和层析相结合——亲和双水相：即在PEG或Dextran上接上一定的亲和配基，这样不但使体系具有双水相处理量大的特点，而且具有亲和层析专一性高的优点。 * 第七章 反胶束萃取 一、基本概念 1．反胶束（Reversed micelles） 是两性表面活性剂在非极性有机溶剂中亲水性基团自发地向内聚集而成的，内含微小水滴的，空间尺度仅为纳米级的集合型胶体。 一、基本概念 常用的表面活性剂有： 阴离子表面活性剂AOT（丁二酸-2-乙基己基酯磺酸钠），阳离子表面活性剂CTAB（溴化十六烃基三甲胺）、DDAB（溴化十二烷基二甲铵）和TOMAC（氯化三辛基甲铵）。 常用于反胶束萃取系统的非极性有机溶剂有： 环己烷、庚烷、辛烷、异辛烷、己醇、硅油等。 一、基本概念 2．反胶束的特异功能： ◎具有分子识别并通话选择性透过的半透膜的功能； ◎在疏水性环境中具有使亲水性大分子如蛋白质等保持活性的功能。 一、基本概念 3．反胶束的应用： ◎生物膜的简化模型； ◎显示酶类性质的一种模型进行基础性研究； ◎具有新型功能的疏水性反应场； ◎酶和微生物的一种新型的固定化方法； ◎微小型的生物反应器； ◎在生物技术领域中作为生理活性物质以及生物活性大分子的特异性分离场。 一、基本概念 4．反胶束萃取（Reverse micelle extraction）： 利用表面活性剂所形成的反胶束来萃取水相中的生物大分子物质至有机相中的操作过程。 5．反胶束萃取的优点： ◎成本低、溶剂可反复使用； ◎萃取率和反萃取率都很高且具有选择性； 一、基本概念 ◎有可能解决外源蛋白的降解，即蛋白质（胞内酶）在非细胞环境中迅速失活的问题； ◎可用于直接从整细胞中提取蛋白质和酶； ◎分离、浓缩可同时进行，过程简便。 二、反胶束的形成 1．临界胶束浓度： 胶束形成时所需表面活性剂的最低浓度，用CMC来表示，这是体系特性，与表面活性剂的化学结构、溶剂、温度和压力等因素有关。 2．胶束与反胶束的形成 将表面活性剂溶于水中，当其浓度超过临界浓度时，表面活性剂就会在水溶液中聚集在一起而形成聚集体。 二、反胶束的形成 将表面活性剂溶于非极性的有机溶剂中，并使其浓度超过临界胶束浓度，便会在有机溶剂内形成聚集体，这种聚集体称为反胶束。 “水池”（Water pool）：因为 “水池”具有极性，可以溶解具有极性的分子和亲水性的生物大分子，而极性分子和/可亲水性的生物大分子也因此可“溶解”在非极性的有机溶剂中。 二、反胶束的形成 3．反胶束的形状和大小： 通常为球形，也有椭球形或棒形；半径一般为10~100nm。 4．反胶束的制备： ◎注入法：将含有蛋白质的水溶液直接注入到含有表面活性剂的非极性有机溶剂中去，然后进行搅拌直到形成透明的溶液为止。(过程较快、可控制平均直径和含水量。) 二、反胶束的形成 ◎相转移法：将含蛋白质的水相与含表面活性剂的有机相接触，在缓慢的搅拌下，一部分蛋白质转入有机相。（过程较慢、处于稳定的热力学平衡状态和在获得较高的蛋白质浓度。） ◎溶解法：对非水溶性蛋白质可用该法。将含有反胶束的有机溶液与蛋白质固体粉末一起搅拌，使蛋白质进入反胶束中，（需时间较长） C 分级萃取 三、反胶束萃取的推动力 1. 静电相互作用： ★表面活性剂所形成的反胶束内表面带有负电荷（AOT）或正电荷（TOMAC和CTAB）。 ★当溶质所带电荷与表面活性剂相反时，由于静电引力的作用，溶质易溶于反胶束，溶解率或分配系数较大，反之，则不能溶解到反胶束相中。 ★静电相互作用随盐浓度的增大而减弱，蛋白质的溶解率降低。 三、反胶束萃取的推动力 2. 空间相互作用： 酶和蛋白质分子的大小，由于存在空间排阻作用，决定蛋白质的溶解率。相对分子质量增大，空间排 阻作用增大，蛋白质的溶解率降低。 3.疏水性相互作用： 研究表明，疏水性越大，分配系数越大。 四、影响反胶束萃取蛋白质的主要因素 1.与反胶束相有关的因素 ◎表面活性剂的种类 ◎表面活性剂的浓度 ◎表面溶剂的种类 ◎助表面活剂及其浓度 四、影响反胶束萃取蛋白质的主要因素 2. 与水相有关的因素 ◎pH值 ◎离子的种类 ◎离子的强度 四、影响反胶束萃取蛋白质的主要因素 3. 与目标蛋白质有关的因