精诺真技术在肿瘤学中的应用.doc

精诺真技术在肿瘤学中的应用 精诺真精诺真精诺真PET、MRI，精诺真精诺真精诺真Luc-C6 PC-3M-Luc-C6是一个荧光素酶表达细胞系，它起源于PC-3M转移性人前列腺癌细胞，稳定转染了北美萤火虫荧光素酶基因，并由SV-40启动子起始基因的表达。该细胞系可用于建立： 皮下肿瘤模型（图1） 转移肿瘤模型（图2） 原位肿瘤模型（图3） PC-3M-Luc-C6皮下肿瘤模型 PC-3M-Luc-C6可用于测量皮下肿瘤的生长和监测对潜在化学治疗药物的反应。 图1 PC-3M-Luc-C6皮下肿瘤模型的背侧观察。在观察期间内肿瘤的生长以相对的肿瘤体积的影像来反应及量化。5x106个细胞植入雄性无胸腺小鼠，并在五周内以IVISTM成像系统及测径器检测及测量。 PC-3M-Luc-C6骨转移模型 PC-3M-Luc-C6细胞示范了Xenogen成像技术检测转移性肿瘤的功能。心脏内或静脉注射肿瘤细胞可产生实验性转移瘤模型。心内模型如图2所示，转移的征兆在注入的一周以后开始出现。到第三周，小鼠全部在骨中出现转移瘤，例如下颚骨/上颚骨，和/或大腿骨/胫骨。这些转移可用离体成像技术或病理组织学证实。 图2 PC-3M-Luc-C6细胞（3x106）注射入雄性无胸腺小鼠的左心室（n=6）。每周拍摄荧光成像共四周。图为一代表性小鼠的腹侧成像。所选组织以离体成像验证体内出现的迹象。 PC-3M-Luc-C6原位前列腺模型 PC-3M-Luc-C6也可用于建立原位前列腺模型，如第三页图3。体内成像证明了PC-3M-Luc-C6肿瘤在雄性无胸腺小鼠（裸鼠）前列腺内的进程。所有小鼠生成的肿瘤及其平均的肿瘤生物自发光在第五周均与平均肿瘤重量有很好的相关性。 图3 PC-3M-Luc-C6细胞（5x106）注射入雄性无胸腺小鼠前列腺。每周拍摄小鼠荧光成像共五周以检测肿瘤生长。最后，对小鼠施以无痛致死术，并将肿瘤取出并称重。 B16-F10-Luc黑色素瘤 B16-F10-Luc-G5小鼠黑色素瘤细胞系来源于稳定转染了北美萤火虫基因并由SV-40启动子驱动的B16-F10细胞。这种细胞可用于建立皮下或实验转移性肿瘤模型。静脉注入细胞在肺内形成克隆并形成损害，均可以非侵入方式成像反映。图4显示了在肺肿瘤转移实验中的一只代表性小鼠。成像结果于肺表面病害灶计数相比较。发现在平均生物自发光与平均肺损害之间存在显著的统计学联系（R2=0.9833）。成像结果可以准确的反映肿瘤在体内的发生发展的过程。 图4 B16-F10-Luc-G5细胞（5x106）静脉注入雄性无胸腺小鼠肺部并形成克隆（n=60）。体内全部的光学计数与肉眼可见的肺表面损伤相比较以反映生物自发光与传统的检测肺肿瘤负荷的方法之间的相关性。在小鼠处死前（第14-16天），每周计数从体内肿瘤细胞发射的生物自发光两次，并将由背侧及腹侧的观察叠加。 乳腺癌、肺癌和结肠癌 BiowareTM细胞系模型 Xenogen模型也包括MDA-MB231-1uc(D3-H1)人乳腺癌，A549-luc-C8人肺癌，以及HT-29-luc-D6人结肠癌模型。MDA-MB231-1uc(D3-H1)可用于建立原位乳腺肿瘤，及通过静脉注射或从原发肿瘤位点的自发转移而形成实验性肺转移瘤。A549-luc-C8及HT-29-luc-D6可用于建立皮下或转移性肿瘤模型。 发展中的其它细胞系包括激素应答性LNCaP-luc-M6前列腺癌及MCF-7-luc乳腺癌细胞系。请查阅Xenogen BiowareTM 肿瘤学列表以获得完整的细胞系清单，包括已经可获得的和在增加中的细胞系。 信号传导/基于机制的报告 Xenogen BiowareTM 细胞系模型可将荧光素酶表达与癌症发生的关键--信号转导途径联系起来。这些模型可用于追踪一些因子的活化，这些因子标志细胞死亡或生存（p53-RE-1UC）,或血管发生（hVEGF-1uc）。 人VEGF（hVEGF）-luc/PC-3M 模型 血管发生信号可通过hVEGF1-luc/PC-3M细胞系成像，如图5。人VEGF启动子（2.3kb）融合于北美萤火虫基因并稳定导入PC-3M细胞。建立皮下肿瘤模型并成像是通过监测在肿瘤生长过程中hVEGF-luc基因的表达，如同相对于SV-40-luc的表达。体内的成像揭示了在肿瘤生长的早期阶段中hVEGF1-luc相对于SV-40-luc的激活。VEGF这一上调作用可能提供了新发生肿瘤中血管发育的信号。 图5 雄性SCID小鼠左肋皮下接种3x106hVEGF1-luc/PC-3M细胞，右肋接种SV-40-luc/PC-3M细胞。监测生长17天。在接种细胞后第一周内，相对于组成性的SV-40-luc，hVEGF-luc表达快速增加。曲线图显示相对