一站式TRICINE-SDS-PAGE多肽电泳套装使用手册 - 北京天恩泽基因科技.docVIP

归去来系列 CAT#:81205-30 常温运输保存 一站式Tricine-SDS电泳套装 One-Stop Tricine SDSProtein Pack 使用手册V1.0 北京天恩泽基因科技有限公司 北京市海淀区学院南路12号北师大留学生创业园57号楼301室 QQ:944823743，449730601（销售），948393554（技术）， 电话： 010010销售）技术），order@ 产品及特点 SDS-聚丙烯酰胺凝胶多肽电泳(SDS)是目前电泳法变性分离多肽的主要方法，但是单独配制各种溶液十分繁琐，为此天泽基因开发了本产品。它具有下列特点: 一站式，提供除水和样品以外的所有成分。 即开即用，用户不需单独准备各种成分，十分方便。 安全，免去了实验人员接触粉末状的剧毒物品丙烯酰胺。 灵活，高浓度的丙烯酰胺溶液母液可用于配制各种浓度的SDS，满足分离各种大小不同的多肽的要求。 电泳后可直接用于考染、银染、Western杂交等实验。 规格及成分 成份 30次包装（CAT#:81205-30） 保存温度 40%丙烯酰胺溶液（19:1） 配胶缓冲液，3× 200 mL 4℃ 50%甘油 50 mL 4℃ TEMED 1 mL 4℃ 过硫酸铵（干粉） 5 g RT 多肽电泳上样液，5× 1 mL -20℃ 阳极电泳液，1×（干粉） 10 L RT 阴极电泳液，1×（干粉） 10 L RT 使用手册 1份 ＊：棕色瓶包装。 运输及保存 常温运输，保存条件见上表，有效期一年。 自备试剂 去离子水 使用方法 根据平板的面积、需要制备的胶的厚度，估计需要配制的浓缩胶（stacking gel）和分离胶（seperating gel）的体积。 配制10%的分离胶 A：新鲜配制10%的APS（过硫酸铵）：按每0.1克过硫酸铵干粉加1mL超纯水的比例将水加到装有硫酸铵干粉的1.5mL EP管中，摇晃到粉末全部溶解。配制好的10%的APS溶液可以在4℃存放一周。 B：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、40%丙烯酰胺溶液和4×分离胶缓冲液。以下只是配制10 mL胶的用量，配制其他体积的胶时，各成分的用量需按比例调整。丙烯酰胺单体具有神经毒性，一定要戴手套操作。 胶浓度 用量（单位：mL） 总量 水 40% 丙烯酰胺 4×分离 胶缓冲液 50%甘油 10% 3.00 2.50 2.50 2.00 10 C：摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应）。 D：加入50 uL新鲜配制的10%APS和10uL TEMED（配制其他体积的胶时，APS和TEMED的用量需按比例调整），迅速摇匀后倒胶。 E: 在胶的液面距离顶部1.5cm的时候，或者距梳子齿0.5cm时，停止灌胶，再覆盖一层1-5 mm的水，使胶顶部液面平整。 F：室温聚合30-60分钟（低温抑制聚合反应）。 G: 用1×浓缩胶缓冲液洗涤凝固的胶的顶部，待用。可4℃存放一周。 配制4%浓缩胶 A：在一个25mL的三角瓶中，先按下表的用量加入水、40%丙烯酰胺溶液和4×浓缩胶缓冲液。以下只是配制10 mL胶的用量，配制其他体积的胶时，各成分的用量需按比例调整。丙烯酰胺单体具有神经毒性，一定要戴手套操作。 胶浓度 用量（单位：mL） 总量 水 40%丙烯酰胺 4×分离胶缓冲液 4% 6.50 1.00 2.50 10 注：浓缩胶不需要甘油。 B: 摇晃混匀后抽真空10-15分钟以去除溶液中的氧气（氧气能抑制丙烯酰胺聚合反应，不去除将影响丙烯酰胺聚合反应）。 C: 按上表用量加入10%APS和TEMED（配制其他体积的胶时，APS和TEMED的用量需按比例调整），迅速摇匀后倒胶。 D: 在液面达到顶部时停止灌胶，插入梳子。 E: 室温聚合30-60分钟（低温抑制聚合反应）。 拔出梳子，用1×电泳缓冲液冲洗加样孔。 将凝胶板固定在电泳装置上，往上槽加入足够1×阳极缓冲液。产品提供10升的阳极缓冲液干粉，将所有干粉溶解在1000mL水中，用浓盐酸调pH到8.9（25℃）即得10×阳极缓冲液，灭菌后可以4℃放置，用时再稀释成1×阳极缓冲液。 往下槽加入足够的1×阴极缓冲液。产品提供10升的阴极缓冲液干粉，将所有干粉溶解在1000mL水中即得10×阴极缓冲液，可以室温放置，不需要灭菌，用时再稀释成1×阴极缓冲液。 在蛋白质样品中加入5×多肽上样液（4uL样品加1uL上样液），100℃煮沸3-5分钟。短暂离心，取上清上样。 先用30V恒压的电泳1小时（对0.75mm厚×14cm×14cm的胶而言）直到染料进入从浓缩胶进入分离胶。 将电压增加