第七 章 基因的表达与调控(下).pptVIP

增强子特性： 增强效应十分明显 一般能使基因转录频率增加10~200倍，有的可以增加上千倍，如经人巨大细胞病毒增强子增强后的珠蛋白基因表达频率比该基因正常转录高600~1 000倍； 增强效应与其位置和取向无关 不论增强子以什么方向排列(5→3或3→5)，甚至与靶基因相距3k bp或在靶基因下游，均表现出增强效应； 大多为重复序列 一般长约50bp，适合与某些蛋白因子结合。其内部常含有一个核心序列：(G)TGGA／TA／TA／T(G)，该序列是产生增强效应时所必需的； 其增强效应有严密的组织和细胞特异性 说明增强子只有与特定蛋白质(转录因子)相互作用才能发挥功能； 没有基因专一性 许多增强子还受外部信号的调控 如金属硫蛋白基因启动区上游所带的增强子，就可以对环境中的锌、镉浓度做出反应。 反式作用因子 参与所有或某些转录阶段的RNA聚合酶亚基，不具有基因特异性； 与转录的起始或终止有关的辅助因子，不具有基因特异性； 与特异调控序列结合的转录因子。 它们中有些被认为是转录复合物的一部分，因为所有或大部分基因的启动区都含有这一特异序列。更多的则是基因或启动子特异性结合调控蛋白，它们是起始某个(类)基因转录所必需的。 螺旋—转折—螺旋(helix—turn—helix，H—T—H)结构 蛋白质分子中有至少两个α螺旋，中间由短侧链氨基酸残基形成“转折” 近羧基端的α螺旋中氨基酸残基的替换会影响该蛋白质在DNA双螺旋大沟中的结合 控制酵母交配型MAT基因座以及果蝇体节发育的调节基因(antp、ftz、ubx)等同源盒(homeobox)基因所编码的蛋白都有H—T—H结构。与DNA相互作用时，同源域蛋白的第一、二两个螺旋往往靠在外侧，其第三个螺旋则与DNA大沟相结合，并通过其N—端的多余臂与DNA的小沟相结合 锌指(zinc finger)结构 三种结构：锌指、锌钮(twist)和锌簇(cluster) 其特有的半胱氨酸和组氨酸残基之间氨基酸残基数基本恒定，有锌参与时才具备转录调控活性。 由于结合在大沟中重复出现的α螺旋几乎联成一线，这类蛋白质与DNA的结合很牢固，特异性也很高。 重复的锌指样结构都是以锌将一个α螺旋与一个反向平行β片层的基部以锌原子为中心，通过与一对半胱氨酸和一对组氨酸之间形成配位键相连接，锌指环上突出的赖氨酸、精氨酸参与DNA的结合。 锌指(zinc finger)结构 类固醇激素受体家族含有连续的两个锌指结构，其中两个锌原子将两个α螺旋装配成类似H—T—H的结构，再以同源或异源性二聚体的方式将两个d螺旋结合在相邻的两个大沟中 碱性—亮氨酸拉链(basic-leucine zipper) 肝脏、小肠上皮、脂肪细胞以及某些脑细胞中存在的一大类C／EBP家族蛋白质，它们的特征是能够与CCAAT盒和病毒的增强子结合。 C／EBP家族蛋白的羧基端35个氨基酸残基具有能形成α螺旋的特点，其中每隔6个氨基酸就有一个亮氨酸残基，这就导致第7个亮氨酸残基都在螺旋的同一方向出现。由于这类蛋白质都以二聚体形式与DNA结合，两个蛋白质α螺旋上的亮氨酸一侧是形成拉链型二聚体的基础。然而，亮氨酸拉链区并不能直接结合DNA，只有肽链氨基端20-30个富含碱性氨基酸结构域与DNA结合。若不形成二聚体，该碱性区对DNA的亲和力明显降低。所以，这类蛋白质的DNA结合结构域实际是以碱性区和亮氨酸拉链结构域整体作为基础的 其它反式作用因子 碱性—螺旋—环—螺旋(basic—helix／loop／helix) 即bHLH结构。 bHLH类蛋白只有形成同源或异源二聚体时，才具有足够的DNA结合能力。当这类异源二聚体中的一方不含有碱性区(如Id或E12蛋白)时，该二聚体明显缺乏对靶DNA的亲和力(图7—22)。 同源域蛋白 同源域(homeo domains)是指编码60个保守氨基酸序列的DNA片段，它广泛存在于真核生物基因组内，同源转换基因与生物有机体的生长、发育和分化密切相关。许多含有同源转换区的基因具有转录调控的功能，同源转换区氨基酸序列很可能参与形成了DNA结合区。 转录活化结构域 基因的表达与调控(下) —真核基因表达调控的一般规律 真核基因表达调控主要步骤 ①什么是诱发基因转录的信号? ②基因调控主要是在哪一步(模板DNA的转录、mRNA的成熟或蛋白质合成)实现的? ③不同水平基因调控的分子机制是什么? 真核细胞与原核细胞差异 一条成熟的mRNA链只能翻译出一条//多条多肽链 DNA是裸露？组蛋白和大量非组蛋白相结合 不转录的DNA序列，重复几百次甚至上百万次；内含子。 DNA片段重排，增加基因的拷贝数， 转录的调节区都很小//多，上游不远处//远离核心启动子达几百个甚至上千个碱基对。 直接影响启动子区对于RNA聚合