植物组织培养3894549634.docVIP

第0章 一、植物组织培养概念 是指用无菌方法使植物体的离体（in vitro）器官、组织和细胞在人为提供的条件下生长和发育的所有培养技术的总称，也称之为离体培养（In vitro culture）或试管培养。 器官（organ)：根、茎、叶、花、果实、种子 组织（tissue)：花药、胚珠、胚、胚乳、形成层等 二、植物组织培养的理论基础 1、细胞全能性（cell totipotency）：植物体的每一个具有完整细胞核的细胞都具有该物种全部遗传的物质，在一定条件下具有发育成完整植物体的潜在能力。 原理：生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因，从理论上讲，生物体的每一个活细胞都应该具有全能性。 差异：（1） 受精卵的全能性最高； （2） 受精卵分化后的细胞中，体细胞的全能性比生殖细胞的低。 2、植物细胞全能性的表达 一个细胞一旦沿着某一条特定的途径分化发育后，一般不会再回复到未分化状态，但在组织培养条件下，可能发生脱分化和再分化。 脱分化（dedifferentiation)：将已分化的不分裂的静止细胞，放在培养基上培养后，细胞重新进入分裂状态。一个成熟的细胞转变为分生状态的过程叫脱分化。 再分化（redifferentiation)：经脱分化的组织或细胞在一定的培养条件下可转变为各种不同的细胞类型，形成完整植株的过程。 外植体（explant）：由活体植物体上切取下来的，用于组织培养的各种接种材料。包括各种器官、组织、细胞或原生质体等。 愈伤组织（callus）：在人工培养基上由外植体上形成的一团无序生长状态的薄壁细胞。 4、植物生长调节物质 又称植物激素，对于植物组织的分化和决定具有关键性作用。 (生长素类 细胞分裂素类 赤霉素 脱落酸 乙烯) 生长素类 主要用于愈伤组织的形成，体细胞胚的产生及试管苗的生根。常用的有2,4-D、NAA、IBA、IAA等。其作用强弱为2,4-DNAAIBAIAA。 细胞分裂素类 促进细胞的分裂与分化，延迟组织的衰老，促进芽的产生等作用。常用的有KT、6-BA、ZT等作用强弱顺序为：KT6-BAZT。 赤霉素 促进已分化的芽伸长生长，打破种子休眠的作用。常用的为GA3 三、组织培养植株再生的途径 1、体细胞胚胎发生途径（胚状体发生途径） 是指在组织培养中起源于一个非合子细胞，经过胚胎发生和胚胎发育过程，形成具有双极性的胚状结构，而发育成再生植株的途径。 双子叶植物胚胎发生：合子－原胚－球形胚－心型胚－鱼雷胚－子叶胚 单子叶植物胚胎发生：合子－原胚－球形胚－盾型胚－子叶胚 体细胞胚胎发生与合子胚发生阶段类似，但体胚形成由体细胞（或小孢子等性细胞）形成。 四、植物组织培养的类型 1、按培养材料分为（Gamborg等） 愈伤组织培养 最为常见的组织培养 器官培养 胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、叶、花和幼果的部分组织的培养 细胞培养 悬浮细胞培养 植株培养 完整植株材料的培养，如幼苗 原生质体培养 除去细胞壁的原生质体 ⑴愈伤组织培养 将外植体接种在人工培养基上，由于植物生长调节剂的存在，而其细胞脱分化形成愈伤组织，然后通过再分化形成再生植株。它是最为常见的。 ⑵器官培养 将植物的器官如胚、胚乳、珠心、子房、根、茎、叶、花和幼果的部分组织接种在无菌培养基上进行培养。 ⑶细胞和原生质体培养 细胞培养是将植物的单个细胞分离出来，并进行培养; 原生质体培养是指将植物细胞的细胞壁通过机械、物理或化学的方法去除，然后再进行培养。 2、根据培养器官的不同： 叶培养、根培养、花药培养、胚珠培养、茎尖培养等 3、根据培养方式不同 固体培养：将培养物放在含有琼脂等固化剂的培养基表面进行培养。常用的方法。该方法简单易行，但养分分布不均，生长速度不均衡，并常有褐化中毒现象发生。 液体培养法：将培养物放在未加固化剂的培养基内培养，一般需进行震荡，又称液体震荡培养。 由于液体中氧气含量较少，常用振动培养的方法以确保氧气的供给。 往复式摇床或旋转式摇床进行培养，既能使培养基均一，又能保证氧气的供给。 4、根据培养过程 初代培养（Primary culture）：指外植体的最初培养。 继代培养（Subculture）：将初代培养得到的培养体移植于新鲜培养基中这种反复多次移植的培养，称为继代培养。 根据培养物量的多少 大量培养、微量培养。 6、根据培养过程中是否需光： 光培养、暗培养 7、根据培养方法的不同： 看护培养、微室培养、悬浮培养 五、植物组织培养的特点 1、培养条件可以人为控制 2、生长周期短，繁殖率高 3、管理方便，利于工厂化生产和自动化控制 组织培养技术在农业生产上的应用：快速繁殖