植物组织培养6141494617.docVIP

第一章：1、植物组织培养：在人工控制的条件下，对植物的离体器官、组织、细胞以及原生质体进行培养，使其生长、分化并成长为完整的植株的技术。 2、分类：①根据外植体分类：器官培养、胚胎培养、组织培养、细胞培养、原生质体培养。②根据培养基及培养方式分类：固体培养和液体培养。③根据有无光照分为：光培养和暗培养。3、1943 White《植物组织培养手册》——世界上第一部有关植物组织培养技术专著。 第二章：1、①广义的细胞全能性是指一个细胞发育成一个完整有机体的潜能或特性。②在离体培养中，植物细胞的全能性是指任何一个具有完整细胞核的植物细胞，都拥有形成完整植株所必需的全部遗传信息，在适宜条件下都能分化发育成一个完整植株的潜在能力。 2、全能性是细胞的一个基本属性：①理论上讲，植物细胞只要具有完整的膜系统和有生命力的核，就具有回复到分生状态的能力。②并非所有的细胞都能再现全能性。细胞回复到分生状态的能力，取决于其在原来所处的自然部位上已经达到的细胞和生理状态。③细胞全能性的再现受到基因型的限制和环境的影响。 3、植物细胞全能性的实现途径 ：植物细胞全能性可以通过生命周期（A循环）、细胞周期（B循环）和组织培养周期（C循环）三条途径得以实现。细胞周期、生命周期和组织培养周期三者密切相关联。 4、脱分化：指已分化成熟的细胞经多次细胞分裂而失去原有的状态和功能而恢复到未分化的愈伤组织或细胞团的过程。愈伤组织：脱分化后的植物细胞，往往经过多次细胞分裂形成一团无特定结构和功能的松散的薄壁细胞。再分化：指离体培养中形成的处于脱分化状态的愈伤组织或细胞团再度分化形成另一种或几种类型的细胞、组织、器官进而形成完整植株的过程。 5、脱分化和再分化的两个条件：①离体条件——把要培养的细胞从植物体其余部分的抑制性影响下解脱出来，即使这部分细胞处于离体的条件下；②外界刺激——要给予它们适当的刺激，包括适宜的营养条件、环境条件以及一定植物激素的作用。 6、脱分化和再分化的过程：植物细胞在离体培养条件下，首先是从分化状态转化成脱分化状态，形成愈伤组织，然后进入再分化过程，并经历器官发生或胚胎发生，最终形成完整植株。（一）脱分化过程与愈伤组织形成（由外植体形成愈伤组织的过程）：分3个时期：诱导期、分裂期、形成期。 （二）再分化过程与植株再生 1．细胞分化 2．组织分化3．器官发生与体细胞胚胎发生（器官发生和胚胎发生有直接发生和间接发生两种方式） 7、分化成熟的细胞要表现其全能性，实现植株再生，必须经历脱分化和再分化过程。 8、器官发生和胚胎发生的区别：①器官发生特点：器官发生是单极性的，起源于多细胞，存在嵌合性，形成部位是内层细胞，形成时间可能不一致②胚胎发生的特点：具双极性，起源于单细胞，不存在嵌合性，形成部位是表层细胞，形成时间一致。 9、体细胞胚胎发生概念：是指体细胞或生殖细胞在未经性细胞融合（受精）的情况下，模拟有性合子胚胎发生的各个阶段而发育成新个体的形态发生过程。 10、由愈伤组织培养而诱导胚状体是胚状体发生中最常见的一种方式，愈伤组织表面和内部细胞均可经诱导产生胚状体。 11、影响细胞脱分化和再分化的因素 ：1、培养材料 （内因）①基因型 ②外植体的生理状态 2、外界影响因素：①培养基②植物激素③环境条件（温度、光照） 12、烟草叶片愈伤组织的诱导和分化P37（实验题自己看） 第三章：1、实验室的设计与要求： （1）化学实验室——器皿清洗贮藏、培养基配制灭菌（2）无菌操作室——材料切割、接种等无菌操作（3）培养室——适宜的光照、温度培养材料（4）观察鉴定室——培养物的观察、鉴定（5）驯化移植室——试管苗驯化、移栽 2、超净工作台的使用：①接通电源②提前20分钟开风机③提前30分钟开台内紫外灯杀菌 3、灭菌器械：包括磨砂玻璃瓶、酒精灯、细胞过滤器、紫外线灭菌灯等。磨砂玻璃瓶或带盖塑料瓶用于植物材料进行表面药剂灭菌，酒精灯用于接种器械的灼烧灭菌，紫外灯用来对接种室、培养室、超净工作台台面等工作环境进行表面和空气灭菌，细菌过滤器用于不宜高温灭菌的试剂溶液的灭菌。 4、环境条件的控制与要求：①光照②温度（对大多数植物而言，25℃±2℃的培养温度是适宜的，低于15℃和高于35℃的温度对培养都不利）③湿度：一般控制在60%~80%之间 ④通气状况 5、组织培养中的无菌技术：①污染来源：植物组织培养中造成培养物污染的微生物主要是细菌和真菌。由细菌引起的污染表现为：培养材料附近出现黏液状或发酵泡状菌斑，或出现浑浊或云雾状痕迹；接种后1~2天即可发现；来源：材料带菌或操作人员不慎或培养基灭菌不彻底。。由真菌引起的污染表现为：在材料表面或周围培养基上形成不同颜色和形状的霉层；接种后5-10天才可发现；来源：材料带菌或接种环境或超净工作台失效 ②污染来源途径：1. 培养器皿