组织与细胞化学.ppt

现代组织化学技术 (Modern Histochemical Technology) ;现代组织化学的内容 1、经典组织化学 2、免疫组织化学 3、电镜与免疫电镜组织化学 4、原位杂交组织化学;组 织 化 学 （Histochemistry）; 一、组织化学的基本概念 ;（三）组织化学的基本原理; （四）组织化学技术的基本要求; 3）乙醇：CH3CH2OH; 1、石蜡切片： 组织取材和固定（甲醛） → 脱水（梯度酒精） → 透明（二甲苯） → 浸蜡（石蜡） → 包埋（石蜡） → 切片（石蜡切片机） → 粘片（载玻片） → 烤片（烤箱） → 组织化学染色程序 ;石蜡切片： 组织取材和固定（甲醛） → 脱水（梯度酒精） → 透明（二甲苯） → 浸蜡（石蜡） → 包埋（石蜡） → 切片（切片机） → 粘片（载玻片） → 烤片（烤箱） → 组织化学染色程序 ;石蜡切片： 组织取材和固定（甲醛） → 脱水（酒精） → 透明（二甲苯） → 浸蜡（石蜡） → 包埋（石蜡） → 切片（切片机） → 粘片（载玻片） → 烤片（烤箱） → 组织化学染色程序;石蜡切片： 组织取材和固定（甲醛） → 脱水（酒精） → 透明（二甲苯） → 浸蜡（石蜡） → 包埋（石蜡） → 切片（切片机） → 粘片（载玻片） → 烤片（烤箱） → 组织化学染色程序 ;石蜡切片： 组织取材和固定（甲醛） → 脱水（酒精） → 透明（二甲苯） → 浸蜡（石蜡） → 包埋（石蜡） → 切片（切片机） → 粘片（载玻片） → 烤片（烤箱） → 组织化学染色程序;石蜡切片： 组织取材和固定（甲醛） → 脱水（酒精） → 透明（二甲苯） → 浸蜡（石蜡） → 包埋（石蜡） → 切片（切片机） → 粘片（载玻片） → 烤片（烤箱） → 组织化学染色程序;石蜡切片： 组织取材和固定（甲醛） → 脱水（酒精） → 透明（二甲苯） → 浸蜡（石蜡） → 包埋（石蜡） → 切片（切片机） → 粘片（载玻片） → 烤片（烤箱） → 组织化学染色程序 ;石蜡切片： 组织取材和固定（甲醛） → 脱水（酒精） → 透明（二甲苯） → 浸蜡（石蜡） → 包埋（石蜡） → 切片（切片机） → 粘片（载玻片） → 烤片（烤箱） → 组织化学染色程序前的处理 → 组织化学染色;组织化学染色程序前的处理: → 脱蜡（二甲苯） → 纯酒精置换二甲苯 → 梯度酒精入水 → 组织化学染色程序 → 常规脱水、透明、封片 ;; 2、 恒冷箱切片 组织取材和固定或不固 定→骤冻（液氮，– 198℃；干冰，–78℃； 冻结金属座，–30℃） → 切片（恒冷箱） → 粘片（载玻片） → 晾片 → 组织化学染色程序 → 常规脱水、透明、封片 ;能够完好地保存细胞膜表面和细胞内多种酶的活性，以及抗原的免疫活性（注意抗体的选择），能够很好地保存脂肪、类脂等成分 步骤更简单，快速、省时 冰冻过程容易使组织中的水分形成冰晶，破坏组织细胞的形态结构，造成抗原的弥散，从而定位不准确 组织过大不容易冻结或组织冻结不均，影响切片及染色效果。 不容易制作较薄的切片，不容易做连续切片，不容易长期保存;糖类显示法;脂类物质显示法 ;常用核酸组织化学;Feulgen反应显示DNA;吖啶橙染色显示DNA和RNA;methyl green-pyronin为碱性染料，它分别能与细胞内的DNA、RNA结合呈现不同颜色。 甲基绿：与染色质中DNA选择性结合显示绿色或蓝色 派洛宁：与核仁、细胞质中的RNA选择性结合显示红色 ;Hoechst33258 和Hoechst33342显示DNA ;DAPI显示DNA ;confocal images of nuclear ethidium bromide (EB) staining;吖啶橙能透过胞膜完整的细胞，嵌入细胞核DNA，使之发出明亮的绿色荧光。 溴化乙锭仅能透过胞膜受损的细胞，嵌入核DNA，发橘红色荧光。 ;碘化丙啶（Propidium Iodide，PI）;在正常细胞中，磷脂酰丝氨酸(PS)位于细胞膜内侧，一旦发生细胞凋亡，可以从细胞膜的内侧迅速翻转到细胞膜外侧，使得PS 暴露在细胞膜表面。 在Ca2+存在时，Annexin V 与PS 有很高的亲和力，可与之迅速结合。PS 外翻发生在细胞核破裂、DNA 片段化以及凋亡相关蛋白出现之前，这使得Annexin V 与