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细 胞 工 程CELL ENGINEERING;《细胞工程》主要内容（1）;《细胞工程》主要内容（2）;参考文献;探究式自主学习计划;探究式自主学习安排（已选）;开展细胞工程的意义;第一章 细胞工程发展简史;植物细胞工程;植物细胞工程;植物细胞工程;二. 动物细胞工程;动物细胞工程;动物细胞工程;第二章 细胞工程的基础知识与基本技术;二.基本操作;基本操作;第三章 植物细胞工程;第一节 植物组织培养;植物组织培养过程;植物组培基本过程;配MS培养基;6-苄基腺嘌呤（6-BA）：先加少量0.1mol/L的NaOH和蒸馏水稍加热使其溶解； 萘乙酸（NAA）：先用少量95%乙醇和少量0.1mol/L的NaOH溶解；;不同植物的最适pH值;预备阶段（2）;预备阶段（3）;常用消毒剂的使用和效果 ;植物不同器官的消毒和处理;诱导去分化形成愈伤组织;形成愈伤组织所需的激素;生长素类激素;细胞分裂素类激素;继代增殖阶段;光照培养室;生根长芽阶段;长芽生根阶段;移栽成活阶段;植物组培的优缺点;手指玫瑰;第二节 植物细胞培养和次生代谢物生产;红豆杉合成的紫杉醇是著名的抗癌药物;细胞培养和原植物的天然产物量的比较;从植物培养细胞中获得的各类物质;培养植物细胞制造疫苗;第二节 植物细胞培养和次生代谢物生产;第二节 植物细胞培养和次生代谢物生产;第二节 植物细胞培养和次生代谢物生产;包埋法固定细胞;微胶囊法;第二节 植物细胞培养和次生代谢物生产;褐藻酸钙固定细胞 无菌大量培养植物细胞 等量混合→ 注入尼龙网→ 配制4%褐藻酸钠，灭菌 氯化钙溶液（2%）浸浴 褐藻酸钙固定的细胞团 ;第二节 植物细胞培养和次生代谢物生产;立柱培养系统操作要素： 取静止期细胞，并使细胞达到一定密度； 控制营养液的成分（包括激素）、浓度及O2供应； 某些种的细胞培养需光照； 尽可能选择次生代谢物能自然或诱导后从细胞内释出的植物（品种）；;提高次生代谢物产量的途径 生物种性： 1.选择高产的品系或细胞系； 目测法，化学分析法，外因选择法； 2.诱变筛选高产细胞系： 化学法，物理法； 3.通过细胞融合或基因工程创造高产细胞系；;提高次生代谢物产量的途径 培养条件: 1.培养基： A 碳源：常用蔗糖，但应因种摸索； B 氮源：常用NO3-和NH4+，（或单用或兼用）； C 生长调节剂：生长素及细胞分类素。两者 的比例对细胞生长、分化及次生代谢物生 产具极大影响； D 供给目的产物的直接或近直接前体物质； ;提高次生代谢物产量的途径 培养条件: 2.物理因子： A 光质和光量（适量光照）； B 温度：25~30℃； C 通气：底部通气好； D pH值：5~6;第三节 植物原生质体制备与融合;植物原生质体研究的意义;植物原生质体的制备(1);酶解法 1.酶的购置与纯化 市售的纤维素酶一般都是复合酶，含： 纤维素酶C1； 纤维素酶Cx； 纤维二糖酶； 果胶酶； 磷脂酶； 核酸酶； 过氧化物酶； 酚类； 此外，还有蜗牛酶；;酶解法 2.取材：干净，高活性 A 幼嫩的根、茎、叶； B 悬浮培养的细胞和体细胞胚； 无需灭菌，最好同步化； C 花粉母细胞和四分体； 分生能力强，应使用蜗牛酶；;外植体除菌： 外植体 肥皂水洗 清水洗 酒精 （75%，10s） 次氯酸钠（3%，15min） 无菌水洗3~4次 无菌滤纸吸干 ;外植体酶解 除菌后叶片 撕去下表皮 切块放入反应液 25～30℃ 不时轻摇 反应液转绿 2～4 h ;外植体酶解 缓冲液：pH值 5.5~5.8 渗透压稳定剂：糖、甘露醇、山梨醇等 膜保护剂：钙盐、牛血清蛋白、葡萄糖硫酸钾（0.3%） 表面活性剂：Tween 80 适当时间 适当温度;原生质体分离 过滤法 离心法（低速） 漂浮法（不同比重）;原生质体洗涤 以新的渗透压稳定剂或培养液轻轻洗涤2~4次;;原生质体鉴定 1.直接镜检：