专题1 基因工程(一轮复习).ppt

专题一 基因工程 一、基因工程的概念 基因工程：按照人们的愿望，进行严格的设计，并通过体外DNA重组和转基因技术，赋予生物以新的遗传特性，从而创造出更符合人们需要的新的生物类型和生物产品。由于基因工程是在DNA分子水平上设计和施工的，因此又叫DNA重组技术 对基因工程的概念理解 1.供体：提供__________ 2.操作环境：______ 3.操作水平：__________ 4.原理：__________ 5.受体：表达目的基因 6.本质：性状在______体内表达 7.优点：克服_______________障碍，定向改造生物_____ 目的基因 体处 分子水平 基因重组 受体 远缘杂交不亲和 性状 一、基因工程的基本工具 （1）来源：主要从______生物中分离纯化出来。 （2）作用：识别特定的___________并切开相应两个核苷酸之 间的_____________。 （3）结果：产生__________或平末端。 原核 核苷酸序列 磷酸二酯键 黏性末端 1.限制性核酸内切酶（简称：限制酶） 2.DNA连接酶 （1）种类：按来源可分为E·coliDNA连接酶和T4DNA连接酶。 （2）作用：在两个核苷酸之间形成____________以连接______________。 磷酸二酯键 两段DNA片段 G A A T T C G C T T A A A A T T C G 限制酶切割ＤＮＡ分子示意图 C T T A A G 思考 　　要想获得某个特定性状的基因必须要用限制酶切几个切口？可产生几个黏性末端？ 两个切口，四个黏性末端。 一、基因工程的基本工具 作用： 具备的条件 种类： 将外源基因送入受体细胞。 能在宿主细胞内复制并稳定地保存 具有多个限制酶切点 具有某些标记基因 质粒、噬菌体和动植物病毒。 使用运载体的目的： 用它作为运载工具，将目的基因送到宿主细胞中去。 一、基因工程的基本工具 ３、基因的运输工具——运载体 （2）提取目的基因的途径 提取目的基因的途径 人工合成基因（真核细胞） 反转录法 根据已知氨基酸 序列合成DNA 从供体细胞的DNA 中直接分离基因 方法：鸟枪法 三、基因工程的基本操作程序 2、目的基因与运载体结合 三、基因工程的基本操作程序 （1）由图可知载体的组成：_________、启动子、终止子、_____ _____。 （2）构建目的： ①使________在_________中稳定存在，并且可以遗传给下一代； ②使________能够表达和发挥作用。 目的基因 标记 基因 目的基因 目的基因 受体细胞 载体(质粒) 同一种限制酶切割 带有黏性 末端切口 带有相同黏性末端 的目的基因片段 重组DNA(环状重组质粒) DNA连接酶 DNA分子(含目的基因) 2、目的基因与运载体结合 3、将目的基因导入受体细胞 将目的基因导入受体细胞 将受体细胞进行扩增 三、基因工程的基本操作程序 （1）转化:目的基因进入受体细胞内,并且在受体细胞内维持___________的过程。 （2）常用方法 ： 导入植物细胞:_____________、基因枪法、花粉管通 道法 导入动物细胞:_____________ 导入微生物细胞:感受态细胞法（或Ca2+处理法） 稳定和表达 农杆菌转化法 显微注射技术 生物种类 植物 动物 微生物 常用方法 受体细胞 转化过程 农杆菌转化法 显微注射技术 感受态细胞法 体细胞 受精卵 原核细胞 将目的基因插入到Ti质粒的T-DNA上→农杆菌→导入植物细胞→整合 到受体细胞的DNA上→表达 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵(受精卵)→显微注 射→受精卵发育→获得具有新性状的动物 Ca2+ 处理细 胞→感受态细 胞→重组表达 载体DNA分子 与感受态细 胞混合→感 受态细胞吸 收DNA分子 4、目的基因的检测与表达 三、基因工程的基本操作程序 （1）_________________→目的基因的有无 （2）分子杂交技术→________________ （3）_______________→目的基因是否翻译 （4）生物性状的表达与否→目的基因是否表达（个体水平） 注：启动子、终止子与起始密码子、终止密码子不同：启动子、终止子在DNA 上,在遗传信息转录时起调控作用；而起始密码子、终止密码子在mRNA上,在翻译时起作用,决定翻译的开始和结束。 分 子 水 平 DNA分子杂交技术 目的基因是否转录 抗原—抗体杂交 三、基因工程的基本操作程序 基因工程的基本内容 基因操作 的基本步骤 基因操作 的工具 限制性内切酶 DNA连接酶 运载体 目的基