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基础回顾 考点探究 专题一 基因工程原理及技术 2016备考·最新考纲 1．基因工程的诞生(Ⅰ)。 2.基因工程的原理及技术(Ⅱ)。 一、基因工程的基本工具 1．限制性核酸内切酶 (1)来源：主要从 生物中分离纯化而来。 (2)作用：识别特定的 并切开相应两个核苷酸之间的 。 (3)结果：产生 或平末端。 原核 核苷酸序列 磷酸二酯键 黏性末端 2．DNA连接酶 (1)作用：将限制酶切割下来的DNA片段 。 (2)类型 拼接成DNA分子 常用类型 E·coli DNA连接酶 T4 DNA连接酶 来源 T4噬菌体 功能 连接黏性末端 连接 结果 恢复被限制酶切开的两个核苷酸之间的 大肠杆菌 黏性末端和平末端 磷酸二酯键 3.载体 双链环状DNA分子 限制酶切割 位点 标记基因 动植物病毒 深度思考 如图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，则图中依次表示限制性核酸内切酶、DNA聚合酶、DNA连接酶、解旋酶作用的正确顺序如何？ 二、基因工程的操作程序 基因文库 PCR 启动子 标记基因 动物细胞 显微注射技术 受精卵 将含有目的基因的表达载体提纯→取卵→获得受精卵→显微注射→早期胚胎培养→胚胎移植→发育成为具有新性状的动物 微生物细胞 Ca2＋处理增大细胞壁通透性 原核细胞或酵母菌 用Ca2＋处理细胞→感受态细胞→重组表达载体DNA分子与感受态细胞混合→感受态细胞吸收 深度思考 基因工程中，需使用特定的限制酶切割目的基因和质粒，便于重组和筛选。已知限制酶Ⅰ的识别序列和切点是—G↓GATCC—；限制酶Ⅱ的识别序列和切点是—↓GATC—。 请据图分析： 切割目的基因时宜选择限制酶Ⅰ还是限制酶Ⅱ切割质粒呢？请说明理由。 提示　由题图及题干信息知，目的基因两侧分别含 —GGATCC—序列和－GATC－序列，若使用酶Ⅰ切割，只能切断一侧，不能切断另一侧，若使用酶Ⅱ切割，则可同时切断两侧，从而切出目的基因，同理，质粒中也含两种酶识别位点，且两识别位点均位于标记基因部位。若使用酶Ⅱ切割质粒，则可同时破坏两个标记基因，使用酶Ⅰ切割则可保留Gene Ⅰ作标记基因，故切割目的基因应选择酶Ⅱ，切割质粒应选择酶Ⅰ。 考点一　基因工程的原理及工具　 [典例引领] 【典例】 (2012·课标，40)根据基因工程的有关知识，回答下列问题。 (1)限制性核酸内切酶切割DNA分子后产生的片段，其末端类型有________和________。 (2)质粒运载体用EcoRⅠ切割后产生的片段如下： AATT C……G G……CTTAA 平末端　 黏性末端 为使运载体与目的基因相连，含有目的基因的DNA除可用EcoR Ⅰ切割外，还可用另一种限制性核酸内切酶切割，该酶必须具有的特点是____________________。 (3)按其来源不同，基因工程中所使用的DNA连接酶有两类，即________DNA连接酶和________DNA连接酶。 (4)反转录作用的模板是________，产物是_____________。 若要在体外获得大量反转录产物，常采用________技术。 (5)基因工程中除质粒外，_________和______也可作为运载体。 (6)若用重组质粒转化大肠杆菌，一般情况下，不能直接用未处理的大肠杆菌作为受体细胞，原因是______________。 切割产生的DNA片段末端与 EcoRⅠ切割产生的相同 T4　 E·coli mRNA cDNA PCR 动植物病毒　噬菌体 未处理的大肠杆菌吸收 外源DNA的能力极弱 1．基因工程的基本原理和理论基础概括(如下图) 2．限制酶选择的注意事项 [跟进题组] 1．下列有关限制性核酸内切酶的叙述中正确的是(　　) A．用限制性核酸内切酶切割一个DNA分子中部，获得一个目的基因时，被水解的磷酸二酯键有2个 B．限制性核酸内切酶识别序列越短，则该序列在DNA中出现的几率就越大 C．—CATG↓—和—G↓GATCC—序列被限制酶切出的黏性末端碱基数不同 D．只有用相同的限制性核酸内切酶处理含目的基因的片段和质粒，才能形成重组质粒 解析　切割一个DNA分子中部，获得一个目的基因时，被水解的磷酸二酯键有4个；—CATG↓—和—G↓GATCC—序列被限制酶切出的黏性末端碱基数相同，都为4个碱基；只要切割出来的黏性末端