绿茶粗提物中的EGCG分离纯化.docVIP

精品论文 参考文献 绿茶粗提物中的EGCG分离纯化 庞玉娜 （广西博白县人民医院药剂科 广西博白 537600） 【中图分类号】R965【文献标识码】B【文章编号】1672-5085（2012）9-0272-02 【摘要】目的 分离纯化绿茶粗提物中的表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)。方法 绿茶粗提物(含EGCG60%,),用石油醚-乙酸乙酯进行梯度洗脱，等量（500ml）收集流分，用旋转蒸发仪浓缩，薄层层析分析流分，合并相同流分重复快速干柱层析。用高效液相测定EGCG的纯度。结果 用硅胶快速干柱法快速重复层析两次就可得到纯度80%以上的EGCG。结论 用快速干柱法分离速度快，而且上样量大。用石油醚-乙酸乙酯洗脱剂毒性低，具有工艺简单、操作方便、成本低的特点。 【关键词】EGCG 分离 快速干柱法 薄层层析 1 EGCG的分离纯化 1.1快速柱层析分离 工艺流程:取50g 茶叶粗提物加适量95%乙醇, 加入50g 硅胶H, 混匀,调成糊状,60℃水浴蒸干, 并充分研磨成细粉。取400g硅胶H 经105℃、30min活化，装入清洁、干燥的玻璃层析柱, 压实，以石油醚洗脱至硅胶层稳定, 将样品装入层析柱,并盖一张滤纸。依次用石油醚，含乙酸乙酯10%、30%、50%、80%的石油醚进行梯度洗脱,旋转蒸发仪浓缩流分，薄层层析法检测流分, 用标准品进行对照。再含EGCG的流分合并。用同样的程序进行另外4根柱，共分离样品250g。再把5根柱含EGCG的流分合并，重复层析两次，最后得到粉末状、微褐色的固体EGCG100g。 1.2成分鉴定及纯度测定 薄层层析法：分别取EGCG标准品和上述分离得到的EGCG固体粉末少量，用95%乙醇溶解，进行薄层层析,展开剂为（乙酸乙酯：甲醇=8：1），显色剂为1%FeCl3甲醇溶液。 高效液相（HPLC）对EGCG样品进行鉴定和纯度测定: 色谱柱：芬兰产C18柱（Phi;5um,4.6times;150mm）流动相：0.5%三乙胺和1%醋酸的水溶液-乙氰（82：18） 流速：1.0 ml/min, 检测波长:280nm, 柱温：35℃ 溶剂：甲醇 2 结果 2.1薄层层析结果 2.2高效液相结果 EGCG标准品谱图 EGCG样品谱图 溶剂甲醇的高效液相谱图 从高效液相得到EGCG的纯度为80%，这样的纯度已经可以作为结构修饰的先导化合物。 3 结论 茶叶的资源非常丰富,茶叶中重要组分儿茶素是优良的生物催化剂,其还能逆转肝癌多药耐药性，生产儿茶素或表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG)具有良好的前景。用硅胶快速干柱法从绿茶粗提物中进一步分离纯化得到EGCG, 所用试剂在普通实验室条件下均能获得, 而且操作简单, 其得率也很高，实为一种较为理想的分离方法。 参 考 文 献 [1] 王颖.从茶叶废料中提取茶多酚和咖啡碱[J].广西化工，1995，12(2)：107-109. [2] Kang guanwen,Qian Benzhi,Ren Quili,et al.Extraction of natural effective antioxidants from tea and study of oxidation resistance [J].Taiyuan Gongye Daxue Xuebao,1989,20(3):49-52. [3] 张帅.茶叶中儿茶素的提取研究[J].安徽农业科学，2007，35(30)：9692-9693. [4] 汪小刚.天然抗氧化剂茶多酚制备研究进展[J].茶叶科学技术，1997，(1)5-38，31. [5] 葛宜掌,金红.可溶金属盐离子提取茶多酚的最佳工艺和参数[J]，精细化工,1995 ，12(6)：3-6. [6] 葛宜掌,金红.茶多酚的离子沉淀提取法[J].应用化学，1995,12 (2):107-109. [7] 宓晓黎,杨焱.超临界二氧化碳萃取茶叶中EGCG等儿茶素组分的工艺研究[J].中国茶叶：1997 ，19(6)：18-19. [8] 钟世安,周春山,杨娟玉.高效液相色谱法分离???化酯型儿茶素的研究[J].化学世界2003,44(5) : 237-239 245，249. [9] 宋世廉,于文潮 从茶叶下脚料提取儿茶素的新方法[J].